2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:篩選和鑒定人骨髓間充質(zhì)干細胞(hMSCs)成骨分化相關(guān)的lncRNAs。
   方法:利用Refseq,UCSC knowngenes,Ensembl,H-invDB7.0,RNAdb2.0,NRED生物軟件分析成骨基因相關(guān)的lncRNAs,綜合獲得可能的成骨相關(guān)lncRNAs;密度梯度法分離hMSCs,地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉誘導hMSCs成骨分化,通過ALP測定及鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色進行成骨誘導鑒定;qRT-PC

2、R驗證hMSCs成骨分化前、后差異表達的lncRNAs,以及成骨分化前、后差異表達的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP。
   結(jié)果:通過上述生物軟件綜合分析發(fā)現(xiàn)3個成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1周圍存在相關(guān)lncRNAs。4個lncRNAs(AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)與成骨基因Smurf-1相關(guān);2個lncRNAs(AF289591和uc003xb

3、e)與成骨基因BMP1相關(guān);1個lncRNAs(AK056311)與成骨基因MSX1相關(guān)。ALP檢測示:與對照組細胞相比,成骨誘導組細胞1周ALP值最高,達到16.82±1.64nmol/min·OD450,隨著誘導時間的延長,ALP值逐漸降低,3周降至8.37±1.01 nmol/min·OD450。鈣結(jié)節(jié)染色顯示hMSCs成骨誘導分化2周后胞外開始出現(xiàn)少量鈣結(jié)節(jié),隨著誘導時間延長鈣結(jié)節(jié)數(shù)量逐漸增加,成骨誘導至第3周鈣結(jié)節(jié)最多,定量測

4、定鈣濃度達716.10±49.46mg/ml。RT-qPCR結(jié)果顯示絕大部分lncRNAs在hMSCs成骨分化過程中表達均下調(diào),其中2個與Smurf-1相關(guān)lncRNAs(AK096529和uc003ups)與成骨誘導前相比,存在顯著性下調(diào)。1個與MSX1相關(guān)的lncRNAs(AK056311)與成骨誘導前相比,也存在顯著性下調(diào)。同時,成骨分化基因Runx2、ALP表達顯著性上調(diào),MSX1、Smurf-1表達顯著性下調(diào)。
  

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