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1、目的:研究色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎(Pigmented Villonodular Synovitis,PVNS)患者滑膜細(xì)胞生物學(xué)特性及甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)對色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細(xì)胞增殖和凋亡的影響,探討甲氨蝶呤治療色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎的前景。 方法:通過滑膜組織病理求證滑膜性質(zhì),膠原酶消化法分離色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎病人滑膜細(xì)胞,用含10%胎牛血清的D-MEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)一周后通過
2、倒置相差顯微鏡和HE染色觀察色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎病人滑膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)特性?;ぜ?xì)胞通過超微透射電鏡進(jìn)行鑒定。MTT法連續(xù)7天檢測色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎和骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞增殖活力,采用第3代滑膜細(xì)胞觀察藥物的作用,實驗分為4組:實驗分成不同濃度的MTX藥物處理組、未加藥的空白對照組設(shè)MTX濃度為0μmol/L。體外培養(yǎng)的PVNS滑膜細(xì)胞空白對照組和MTX藥物處理組加藥后分別于48h、96h、144h用MTT比色法檢測MTX對PVNS
3、滑膜細(xì)胞增殖的抑制率,流式細(xì)胞儀檢測MTX處理48 h后對細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果:通過病理證實取材標(biāo)本為色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜組織,倒置顯微鏡下和HE觀察發(fā)現(xiàn)色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細(xì)胞增殖速度較骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞快,透射電鏡鑒定本實驗分離的滑膜細(xì)胞為PVNS滑膜細(xì)胞;MTT測定結(jié)果顯示PVNS滑膜細(xì)胞體外培養(yǎng)其增殖活力明顯高于骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞(p<0.05)。MTT的檢測結(jié)果顯示:與空白對照組相比,不同濃度的MTX
4、均顯著抑制PVNS滑膜細(xì)胞的增殖,(p<0.05),且呈時效和量效關(guān)系;MTX體外作用PVNS滑膜細(xì)胞48h后可見凋亡細(xì)胞,MTX0μmol/L組、0.5μmol/L組、1μmol/L組、2μmol/L組細(xì)胞凋亡率分別為6.34±2.05、6.87±3.34、7.45±2.19、8.79±2.59。中高濃度MTX藥物處理組細(xì)胞凋亡率均與空白對照組有差異(p<0.05),且與藥物濃度成正相關(guān)。 結(jié)論:色素沉著絨毛結(jié)節(jié)性滑膜炎滑膜細(xì)
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