Aggrecan基因多態(tài)性與退變性椎間盤疾病的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、退變性椎間盤疾病是以椎間盤退變?yōu)榛静±砘A(chǔ)而引起的一系列脊柱疾患，臨床表現(xiàn)以頸、肩、腰、腿痛為主要癥狀，有或無運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損害體征，發(fā)病率高，給患者帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。分子生物學(xué)的快速發(fā)展為研究椎間盤退變機(jī)制開創(chuàng)了新的局面，國內(nèi)外學(xué)者從分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生物力學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等不同的角度對其病因?qū)W方面進(jìn)行了深入研究探討。揭示椎間盤退變的機(jī)制對退變性椎間盤疾病的治療、預(yù)防有著重要的意義。流行病學(xué)調(diào)查顯示退變性椎間盤疾病與遺傳因素

2、可能有關(guān)，Aggrecan是椎間盤髓核細(xì)胞外基質(zhì)的重要成份，其質(zhì)和量的改變對椎間盤發(fā)生退變有重要的影響。1997年，Doege等報(bào)道Aggrecan基因第12個(gè)外顯子上存在可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)順序(VNTR)多態(tài)性，其重復(fù)次數(shù)的多寡可能決定了核心蛋白的長度和硫酸軟骨素(CS)鏈與之連接的多少，在遺傳和分子水平基礎(chǔ)上決定了Aggrecan的功能特征。Kawaguchi等研究發(fā)現(xiàn)Aggrecan基因VNTR短重復(fù)片段多態(tài)性與MRI上表現(xiàn)早年多節(jié)

3、段嚴(yán)重椎間盤退變有關(guān)聯(lián)。椎間盤突出癥在退變性椎間盤疾病中占重要地位，對人們的健康和生活構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，其具體病因、發(fā)病機(jī)制一直是骨科研究的重點(diǎn)、熱點(diǎn)之一，構(gòu)成椎間盤突出癥的基本因素是椎間盤退變，椎間盤突出癥是否有遺傳因素決定的呢?由于蛋白多糖在椎間盤結(jié)構(gòu)中的重要性，研究Aggrecan基因VNTR多態(tài)性對揭示椎間盤突出癥的病因、發(fā)病機(jī)制、治療及預(yù)防有重要的意義。 第一部分中國南方地區(qū)漢族人群Aggrecan核心蛋白基因串聯(lián)重復(fù)

4、順序多態(tài)性的研究研究目的分析133例中國南方漢族人的Aggrecan核心蛋白基因是否存在可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性及其分布情況。 材料與方法133例中國南方漢族人，其中男77例，女56例，年齡18～90歲，平均54歲。每人抽取外周靜脈血2ml，用試劑盒方法提取基因組DNA，根據(jù)文獻(xiàn)資料設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR技術(shù)從基因組DNA中體外擴(kuò)增Aggrecan核心蛋白基因，獲得目的基因后，對目的基因產(chǎn)物進(jìn)行0.5～1％瓊脂糖凝膠電泳分析，記

5、錄片段的大小，分析Aggrecan核心蛋白基因多態(tài)性分布情況。 結(jié)果133例中國南方漢族人Aggrecan核心蛋白基因存在可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性，實(shí)驗(yàn)共得出8種長短不同的串聯(lián)重復(fù)順序(Allele32、Allele29、Allele28、Allele27、Allele26、Allele25、Allele22、Allelel3)，其分布情況以中等長度重復(fù)順序片段(Allele27占48.49％、Allele28占27.44％、

6、Allele28占12.03％)的出現(xiàn)頻率為主，短和長重復(fù)順序片段(Allelel3占0.38％、Allele22占4.14％、Allele29占1.13％、Allele32占1.88％)的出現(xiàn)頻率較少。 結(jié)論133例中國南方漢族人Aggrecan核心蛋白基因片段中存在可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性，主要以中等長度串聯(lián)重復(fù)順序片段的出現(xiàn)頻率最多，短和長串聯(lián)重復(fù)順序片段的出現(xiàn)頻率較少。 第二部分Aggrecan核心蛋白基因多態(tài)

7、性與椎間盤突出癥的關(guān)聯(lián)性研究研究目的應(yīng)用病例對照研究，探討Aggrecan核心蛋白基因可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性與椎間盤突出癥和椎間盤突出節(jié)段的多少有無關(guān)聯(lián)傾向。 材料與方法102例住院患者，根據(jù)其臨床癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室和影像學(xué)檢查、手術(shù)中的發(fā)現(xiàn)，分為椎間盤突出癥實(shí)驗(yàn)組和非椎間盤突出癥對照組各51例。椎間盤突出癥實(shí)驗(yàn)組：男28例，女23例，年齡18～90歲，平均56歲。單節(jié)段椎間盤突出19例，兩節(jié)段椎間盤突出15例，三個(gè)或三個(gè)以

8、上節(jié)段椎間盤突出17例。非椎間盤突出癥對照組：男33例，女18例，年齡18～83歲，平均51歲。應(yīng)用Cochran-Mantel-HaenszelTest統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析兩組患者的Aggrecan核心蛋白基因串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性的分布情況有無差異，及Aggrecan基因VNTR多態(tài)性與椎間盤突出癥、椎間盤突出節(jié)段多少之間有無關(guān)聯(lián)性傾向。 結(jié)果51例椎間盤突出癥實(shí)驗(yàn)組患者Aggrecan核心蛋白基因串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性分布情況檢測發(fā)現(xiàn)，

9、Aggrecan核心蛋白的等位基因分布以中等長度串聯(lián)重復(fù)順序片段最多見，短和長串聯(lián)重復(fù)順序片段較少見，與對照組患者Aggrecan核心蛋白基因串聯(lián)重復(fù)順序多態(tài)性分布情況相似，兩組中出現(xiàn)頻率最多的基因型是等位基因27，實(shí)驗(yàn)組與對照組Aggrecan核心蛋白的等位基因分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在基因型的分布上兩組情況基本相同，對照組得出7種長短不同的串聯(lián)重復(fù)順序，實(shí)驗(yàn)組只得出6種長短不同的串聯(lián)重復(fù)順序，沒有得到Allele29