mdr1mRNA轉(zhuǎn)染人單個核血細(xì)胞以提高其化療藥物耐受性的體外研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文mdr1mRNA轉(zhuǎn)染人單個核血細(xì)胞以提高其化療藥物耐受性的體外研究姓名：李雷申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：楊秀玉向陽2001.5.1中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士畢業(yè)論文摘要丑的：化療在婦科惡性腫瘤治療中占有極為重要的地位。婦科常見的惡性腫瘤如惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、卵巢癌、宮頸癌等都是對化療較為敏感的腫瘤。其中惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤是僅經(jīng)過化療就可以獲得治愈的疾病。然而，反復(fù)和大劑量化療經(jīng)常會導(dǎo)致骨髓抑制及耐藥現(xiàn)象的

2、發(fā)生。這二者都是目前婦科惡性腫瘤治療中面臨的主要問題。尋求一種化療中能對造血細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)的有效途徑，對于提高惡性腫瘤的治療效果具有非常重要意義。一f本試驗(yàn)的理論基礎(chǔ)基于如下事實(shí)：、1)多藥耐藥基因(mdrl)編碼一種分子量為170kD的跨膜糖蛋白，又稱PgP或P170，可將多種細(xì)胞毒性藥物如泰素(Tax01)、阿霉素(Doxorubicin)、長春新鹼(VCR)及鬼臼乙叉甙(VPl6)等排出細(xì)胞外，從而使細(xì)胞產(chǎn)生對于上述藥物的耐藥性。2

3、)近年來對RNA的深入研究使我們在轉(zhuǎn)染過程中的各個階段都有了保護(hù)mRNA免于快速降解的手段。3)外周血干細(xì)胞移植技術(shù)已相當(dāng)成熟并得到廣泛應(yīng)用。鑒于目前采用的以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方案有較多局限性，所以本研究采用了將人mdrlmRNA導(dǎo)入人單個核血細(xì)胞(主要針對具造血能力的細(xì)胞)的方法。觀察了PgP在轉(zhuǎn)染后單個核血細(xì)胞中的表達(dá)和功能情況，并初步探討此方法中影響Pgp表達(dá)和功能的因素。方法和結(jié)果：本研究包括以下三個部分：一、人mdrl

4、mRNA的體外合成及修飾本研究采用分子生物學(xué)的方法，經(jīng)酶切、補(bǔ)平、連接等一系列分子生物學(xué)操作獲得了體外轉(zhuǎn)錄模板分子，并經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄獲得了目的mRNA。結(jié)果：獲得了可使用T7轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄的無5’和3’UTR的人mdrlcDNA模板和含XenopusBglobin5’和3’UTR的人mdrlcDNA模板。經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄合成了相應(yīng)的mRNA并對其進(jìn)行了適當(dāng)?shù)男揎?。二、富含造血?xì)胞的人單個棱血細(xì)胞的采集本研究采用GCSF，動員骨髓造血干細(xì)胞向外