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文檔簡介
1、卵巢癌是嚴(yán)重威脅婦女生命和健康的常見惡性腫瘤,其發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中排第3位,死亡率位居首位。卵巢癌細(xì)胞對放、化療不敏感或在治療過程中產(chǎn)生耐藥性或抗性是造成腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡率居高不下的重要原因。因此研究卵巢癌放療及化療敏感性的相關(guān)機(jī)制,對提高療效克服放射耐受、化療耐藥、延長患者生存期具有重要的理論及現(xiàn)實(shí)意義。
目前國內(nèi)外主要集中于射線照射對腫瘤細(xì)胞化療耐藥的影響與化療耐藥對腫瘤放射敏感性的影響的研究,而關(guān)于腫瘤放化療交叉
2、耐受性的實(shí)驗研究甚少。探討有關(guān)卵巢癌細(xì)胞的放化療交叉耐受性機(jī)理,尚未見文獻(xiàn)報道。本研究以人卵巢癌細(xì)胞株A2780及其紫杉醇耐藥株A2780/Taxol為研究對象,一方面比較分析人卵巢癌細(xì)胞株A2780及其紫杉醇耐藥株A2780/Taxol的放射敏感性,觀察腫瘤化療耐藥對卵巢癌細(xì)胞放射敏感性的影響;另一方面比較分析照射前后A2780/Taxol細(xì)胞和其親代A2780細(xì)胞中耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)水平的改變,研究放療對化療耐藥的影響。初步探討人卵巢
3、癌細(xì)胞株的放化療交叉耐受性機(jī)理,從而為臨床腫瘤對放化療交叉耐受的逆轉(zhuǎn)提供實(shí)驗依據(jù)。
目的:
1.研究耐藥A2780/Taxol細(xì)胞和其親代A2780細(xì)胞對60Coγ射線的放射敏感性,觀察紫杉醇耐藥A2780/Taxol細(xì)胞是否具有對60Coγ射線的輻射耐受性,分析化療耐藥對放射敏感性的影響。
2.研究照射前后A2780/Taxol細(xì)胞和其親代A2780細(xì)胞中耐藥相關(guān)蛋白P-gp、MRP1、P53、PKC-α
4、的表達(dá)水平改變,分析放射對化療耐藥性的影響。
3.初步探討人卵巢癌細(xì)胞株的放化療交叉耐受性機(jī)理。
方法
1MTT法檢測細(xì)胞的藥物敏感性,繪制細(xì)胞生長曲線,計算細(xì)胞倍增時間,并分析細(xì)胞放射敏感性。
2克隆形成實(shí)驗分析細(xì)胞放射抗拒性。
3流式細(xì)胞術(shù)檢測照射前后細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化。
4Westernblot法檢測照射前后P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表達(dá)情況。
5、r> 結(jié)果:
1.A2780/Taxol細(xì)胞的耐藥指數(shù)為43.96(P<0.01)。
2.不同照射劑量處理后,耐藥的A2780/Taxol細(xì)胞凋亡率均低于其親本細(xì)胞A2780(P<0.05);4Gy60Coγ射線照射后24~72hA2780細(xì)胞呈現(xiàn)G1期細(xì)胞阻滯和S期細(xì)胞比例下降,耐藥的A2780/Taxol細(xì)胞則呈G1期細(xì)胞比例減少和S期細(xì)胞比例增加。
3.WesternBlot法檢測照射前后P-gp、
6、MRP1、P53、PKC-α蛋白的表達(dá)情況:
?。?)A2780細(xì)胞:2Gy、4Gy、8Gy照射作用后,A2780細(xì)胞中P-gp蛋白、MRP1蛋白、PKC-α蛋白、P53蛋白的表達(dá)水平,均高于對照(0Gy)(P<0.05)。
(2)A2780/Taxol細(xì)胞:2Gy照射作用后,A2780/Taxol細(xì)胞中P-gp蛋白、PKC-α蛋白的表達(dá)水平高于對照(0Gy),(P<0.05);2Gy、8Gy照射作用后,A2780/T
7、axol細(xì)胞中P53蛋白的表達(dá)水平,均高于對照(0Gy)(P<0.05)。
(3)比較A2780細(xì)胞和A2780/Taxol細(xì)胞中P-gp、MRP1、P53、PKC-α蛋白表達(dá)水平:在照射前及2Gy、4Gy、8Gy照射作用后,A2780/Taxol細(xì)胞中P-gp蛋白表達(dá)水平,均高于A2780細(xì)胞(P<0.01);在照射前及8Gy照射作用后,A2780/Taxol細(xì)胞中MRP1蛋白表達(dá)水平,均高于A2780細(xì)胞(P<0.01);
8、在照射前及2Gy照射作用后,A2780/Taxol細(xì)胞中PKC-α蛋白表達(dá)水平,均高于A2780細(xì)胞(P<0.05);照射前,A2780/Taxol細(xì)胞中P53蛋白表達(dá)水平高于A2780細(xì)胞(P<0.05)。
結(jié)論:
1.卵巢癌耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol表現(xiàn)出一定程度的輻射抗性,具有放化療交叉耐受性。
2.放射線照射可以改變?nèi)寺殉舶┘?xì)胞株A2780以及其耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol中耐藥相關(guān)蛋白的
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