人外周血單個核細胞體外誘導成為破骨細胞樣細胞及鑒定.pdf

1、目的：探討可行的獲取人破骨細胞樣細胞以供進一步研究的方法。 方法：從健康志愿者抽取外周靜脈血，以密度梯度離心方法獲得單個核細胞，在預先種植了UMR106細胞的蓋玻片及骨片上，用含1，25(OH)2D3、地塞米松和M-CSF的DMEM培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，而在未種植UMR106細胞的蓋玻片上進行培養(yǎng)者作為對照組。每3-4天更換一次培養(yǎng)液并進行觀察。培養(yǎng)至20天，蓋玻片上培養(yǎng)的細胞進行抗酒石酸酸性磷酸酶染色鑒定，以含有至少3個核且抗酒石酸

2、酸性磷酸酶染色陽性者為破骨細胞樣細胞。骨片上培養(yǎng)的細胞進行甲苯胺藍染色及電鏡掃描鑒定。 結果：培養(yǎng)第3天，大部分的單個核細胞貼壁，培養(yǎng)第7天，單個核細胞呈伸展狀態(tài)，部分呈多角形，部分細胞胞漿內顆粒增多，細胞的形態(tài)變化與胞漿內顆粒增多并不一致，培養(yǎng)第10天，實驗組部分細胞體積較前明顯增大，胞漿內顆粒進一步增多，少許細胞出現(xiàn)多核。對照組單個核細胞僅有少數(shù)變成多角形或梭形，細胞體積增大及胞漿顆粒增多現(xiàn)象較少。培養(yǎng)第13天，實驗組中體積

3、有變化者進一步增大，細胞顆粒進一步增多，未出現(xiàn)此類表現(xiàn)者無明顯變化；對照組變化不明顯。在第20天，實驗組有3％的細胞變?yōu)榘w較大的多核細胞(MNC)且抗酒石酸酸性磷酸酶染色陽性，甲苯胺藍染色及掃描電鏡(SEM)檢查發(fā)現(xiàn)骨磨片上有吸收陷窩形成，SEM發(fā)現(xiàn)骨磨片上出現(xiàn)有偽足、多核的巨噬細胞；而對照組沒有出現(xiàn)多核巨噬細胞，沒有出現(xiàn)抗酒石酸酸性磷酸酶染色陽性細胞。 結論：在1，25(OH)2D3、地塞米松和M-CSF存在下，人外周血單個