過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑羅格列酮在血管新生和血管通透性變化中的作用.pdf

1、腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病視網(wǎng)膜病變等常伴隨有血管新生，新生微血管通過給病變組織提供氧和營養(yǎng)促進(jìn)了上述疾病的發(fā)生和發(fā)展。而且新生微血管在結(jié)構(gòu)和功能上缺乏完整性，主要表現(xiàn)為細(xì)胞連接和周細(xì)胞缺失以及基底膜不完整等病理特征，與血管通透性增加密切相關(guān)。高通透性血管有利于腫瘤細(xì)胞和炎癥細(xì)胞的浸潤以及促血管生成因子的生成和局部聚集，是進(jìn)一步惡化疾病的重要因素，因此，抑制病理性血管新生是減緩上述疾病發(fā)生發(fā)展的重要策略。過氧化物酶增殖物激活受體γ(PP

2、ARγ)激動(dòng)劑羅格列酮作為治療II型糖尿病的有效藥物，對(duì)血管新生有顯著的調(diào)控作用，可能成為治療血管新生相關(guān)疾病的潛在藥物，但是目前研究對(duì)羅格列酮和血管新生的關(guān)系存有較大爭(zhēng)議。另外，PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮在治療II型糖尿病時(shí)易造成組織水腫等與血管通透性相關(guān)的副作用，限制了羅格列酮等類似藥物的臨床應(yīng)用。基于此，本研究擬考察羅格列酮與血管新生和血管通透性的關(guān)系，旨在為羅格列酮安全有效地用于治療血管新生相關(guān)疾病提供理論指導(dǎo)。
　　主要研

3、究結(jié)果如下：
　　第一部分：PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)血管新生的影響和機(jī)制
　?、俳Y(jié)合斑馬魚在體血管新生模型、大鼠腹主動(dòng)脈環(huán)離體血管新生模型、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)體外血管新生模型綜合研究了 PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)血管新生的影響，結(jié)果顯示羅格列酮抑制了在體、離體和體外的血管新生，同時(shí)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羅格列酮抑制 HUVECs增殖和遷移。利用 PPARγ拮抗劑 GW9662預(yù)處理阻斷了羅格列酮誘導(dǎo)的系列效應(yīng)，表明羅

4、格列酮作用依賴于PPARγ的活化；
　?、谠诖嘶A(chǔ)上，通過斑馬魚全胚原位雜交和熒光定量PCR分析得知羅格列酮處理后斑馬魚的VEGFR2(flk-1) mRNA表達(dá)下降，提示羅格列酮可能通過抑制VEGF/VEGFR2信號(hào)途徑發(fā)揮血管生成抑制作用。另外，通過細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羅格列酮刺激p53表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)羅格列酮促進(jìn)細(xì)胞凋亡，使用p53抑制劑Pifithrin-a可阻斷羅格列酮誘導(dǎo)的促細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移抑制和血管生成抑制

5、作用，表明羅格列酮與PPARγ結(jié)合后通過激活p53信號(hào)通路促進(jìn)了細(xì)胞凋亡，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)血管新生的抑制作用。
　　第二部分：PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)血管通透性的影響和機(jī)制
　?、偻ㄟ^檢測(cè)羅格列酮對(duì)小鼠背部皮膚血管和HUVECs融合單層細(xì)胞的通透性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，羅格列酮刺激血管通透性增加；
　?、谠诖嘶A(chǔ)上，利用VEGF ELISA檢測(cè)羅格列酮對(duì)HUVECs分泌VEGF蛋白的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)羅格列酮抑制VEGF蛋白分泌，表明羅