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文檔簡介
1、RNase1是動物胰臟分泌的一種重要的消化酶,是胰核糖核酸酶家族的重要成員。因在葉猴中發(fā)現(xiàn)其多拷貝與葉食性密切相關(guān),而成為食性研究的熱點基因之一。鯉科魚類是我國重要的經(jīng)濟魚類,食性廣泛。本研究選取鯉(Cyprinus carpio)、黃尾鲴(Xenocypris davidi)、鳙(Aristichthys nobilis)、鰱(Hypophthalmichthys molitriac)、草魚(Ctenopharyngodon idel
2、lus)、團頭魴(Megalobrama amblycephala)、鳡(Elopichthys bambusa)、翹嘴鲌(Cluter alburnus)8種鯉科魚類為實驗對象,采用染色體步移(Genome walking)的方法克隆了8種魚RNase1基因的蛋白編碼區(qū)(CDS區(qū))全長,分析了這8種魚不同組織RNase1基因的表達差異,分析了鯉、團頭魴、鳙和翹嘴鲌不同組織RNase1蛋白的表達差異,獲得如下結(jié)果:
(1)8種
3、鯉科魚類RNase1基因的克隆和理化性質(zhì)分析。鯉RNase1基因序列總長度為940 bp,其中CDS序列長度447 bp,編碼149個氨基酸,預(yù)測分子量為17.49KDa,理論等電點(PI)為9.10;黃尾鲴RNase1基因序列總長度為1401 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼152個氨基酸,預(yù)測分子量為17.49 KDa,PI為9.10;鳙RNase1基因序列總長度為2014 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼152
4、個氨基酸,預(yù)測分子量為17.33 KDa,PI為8.53;鰱RNase1基因序列總長度為2756 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼152個氨基酸,預(yù)測分子量為17.26 KDa,PI為8.78;草魚RNase1基因序列總長度為1033 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼152個氨基酸,預(yù)測分子量為16.80 KDa,PI為9.05;團頭魴RNase1基因序列總長度為856 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼15
5、2個氨基酸,預(yù)測分子量為17.32 KDa,PI為9.11;鳡RNase1基因序列總長度為1439 bp,其中CDS序列長度456bp,編碼152個氨基酸,預(yù)測分子量為17.40 KDa,PI為9.11;翹嘴鲌RNase1基因序列總長度為1643 bp,其中CDS序列長度456 bp,編碼152個氨基酸,預(yù)測分子量為17.26 KDa,PI為8.94。BLAST分析顯示8種鯉科魚類間的RNase1基因編碼的氨基酸序列相似度較高(65.7
6、%~99.2%),均具有24個氦基酸左右的信號肽序列,保守的“CKXXNTF”功能區(qū),3個催化堿基(1個賴氨酸和2個組氨酸)形成催化三聯(lián)體,同時包括6個半胱氨酸形成3個二硫鍵。氨基酸進化樹顯示團頭魴與翹嘴鲌關(guān)系最為接近,鳡與黃尾鲴接近,鰱鳙接近,它們都與青鳉差異最大。
(2)熒光定量實驗采用β-actin為內(nèi)參基因,結(jié)果顯示:肌肉組織中PNase1基因在鳙的表達量最高,團頭魴最低,鰱和鳙高于其它魚類;性腺、心臟、肝、脾、腎中,
7、鰱和鳙RNase1基因的表達量與其它魚類差異顯著(P<0.05);鰓、腦、腸道中,鳙RNase1基因表達量較高,與其它魚類差異顯著;血液中,翹嘴鲌RNase1基因表達量較高,與其它魚類差異顯著;除鳡以外其它鯉科魚類均呈現(xiàn)腸RNase1基因表達量最高,與其它組織表達差異顯著(P<0.05),肝、腎的RNase1基因表達量也相對其它組織較高。其中鰱和鳙血液中的RNase1基因表達量也相對較高。
(3)為了研究不同組織RNase蛋白
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