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文檔簡介
1、病原侵染機(jī)體時,末端補(bǔ)體成分(terminal complement components,TCC)C6、C7、C8a、C8B和C9參與形成膜攻擊復(fù)合物(Membrane attack complex,MAC),MAC能夠貫穿細(xì)胞膜,最終導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解。本文對黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)TCC相關(guān)基因C8a、C8B和C9基因進(jìn)行了克隆鑒定,使用RT-PCR技
2、術(shù)對其在黃河鯉不同組織和早期發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行分析,主要結(jié)果如下:
分別使用簡并引物擴(kuò)增得到黃河鯉C8a、C8B和C9基因的中間片段,使用RACE擴(kuò)增獲得C8a的cDNA全長為2066 nt,ORF為1785nt,編碼595個氨基酸,與斑馬魚(Danio rerio)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)和香魚(Plecoglossus altivelis)C8a蛋白相似性分別為72%、53%和51%;C8B的cDN
3、A全長為1994 nt,ORF為1716 nt,編碼573個氨基酸,與斑馬魚、虹鱒、紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)和牙鲆(Paralichthysolivaceus)C8B蛋白相似性分別為75%、61%、58%和56%;C9 cDNA全長為2155 nt,ORF為2028 nt,編碼675個氨基酸,黃河鯉C9與草魚(Ctenopharyngodon idella)、斑馬魚、虹鱒和牙鲆C9的氨基酸相似性分別為77%、75
4、%、49%和49%。多序列比對結(jié)果顯示黃河鯉C8a、C8g和C9存在TCC基因共有的28個保守的半胱氨酸殘基,結(jié)構(gòu)域搜索顯示黃河鯉C8a、C8B和C9都含有TSP、LDL-R、MACPF和EGPF等保守的結(jié)構(gòu)域。
RT-PCR檢測C8a、C8B和C9轉(zhuǎn)錄本在黃河鯉不同組織和早期發(fā)育階段中的表達(dá),結(jié)果顯示3個基因在鰓、肝胰腺、腎臟、脾臟、頭腎、心臟、腸道、腦、肌肉等被檢組織和血液中呈組成型表達(dá),其中在肝臟中表達(dá)量最高。在黃河鯉早
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