鏡鯉肌肉品質(zhì)性狀SSR分析與HUFA合成關(guān)鍵酶基因克隆及表達(dá).pdf

1、為了深入探討鯉肌肉品質(zhì)性狀改良和鯉的高不飽和脂肪酸(HUFA)合成代謝調(diào)控機(jī)制,本研究分析微衛(wèi)星標(biāo)記與鏡鯉肌肉脂肪和蛋白質(zhì)含量之間的相關(guān)性,找到了與這兩種性狀相關(guān)的優(yōu)勢(shì)基因型。使用RT-PCR和RACE方法克隆鏡鯉肝臟中高不飽和脂肪酸合成關(guān)鍵酶基因Δ6脂肪酸脫氫酶(Δ6FAD)基因和脂肪酸延長(zhǎng)酶5(ELOVL5)基因,并對(duì)其組織表達(dá)特性進(jìn)行了研究,這將有助于探明鯉HUFA合成代謝調(diào)控機(jī)制,研發(fā)提高鯉HUFA合成能力的方法,促進(jìn)鯉魚配合飼

2、料的研究和應(yīng)用及其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
　　主要結(jié)果如下:
　　(1)利用233個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記檢測(cè)鏡鯉(Cyprinus carpio)一個(gè)家系的107尾個(gè)體的基因型,采用GLM方法對(duì)肌肉脂肪含量和蛋白質(zhì)含量進(jìn)行單標(biāo)記回歸分析。Permutation檢驗(yàn)結(jié)果顯示:有17個(gè)標(biāo)記分別與肌肉脂肪和蛋白質(zhì)含量具有顯著相關(guān)性(P<0.05),其中,有4個(gè)標(biāo)記(HLJ030、HLJ2560、HLJ3633和HLJ3554)與肌肉蛋白質(zhì)含量呈極顯

3、著相關(guān)(P<0.01),表明這些標(biāo)記與性狀間可能存在連鎖關(guān)系。
　　(2)獲得Δ6脂肪酸脫氫酶基因全長(zhǎng)序列(KJ576791),其cDNA全長(zhǎng)為1471bp,編碼444個(gè)氨基酸。氨基酸序列與已克隆的魚類Δ6或Δ5脂肪酸脫氫酶具有65％-91％相似性,且具有典型的脂肪酸去飽和酶的結(jié)構(gòu)特性具有典型的脂肪酸脫氫酶基因的特征結(jié)構(gòu)。
　　(3)獲得脂肪酸延長(zhǎng)酶5基因全長(zhǎng)序列(KF924199),其cDNA全長(zhǎng)1121bp,編碼291個(gè)

4、氨基酸。氨基酸序列與已克隆的魚類脂肪酸延長(zhǎng)酶5基因的氨基酸序列具有74％-93％同源性,且具有典型的脂肪酸延長(zhǎng)酶的結(jié)構(gòu)特性。
　　(4)通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)兩個(gè)基因在鏡鯉不同組織中的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)鏡鯉Δ6脂肪酸脫氫酶(Δ6FAD)基因在肝臟中表達(dá)最高,其次是背肌、腹肌和腦,在心、腎、腸等組織中表達(dá)水平很低或難以檢測(cè)到。鏡鯉脂肪酸延長(zhǎng)酶5(ELOVL5)基因在鏡鯉肝臟中表達(dá)量最高,其次為腦,在背部肌肉中表達(dá)最低