文昌魚類tachylectin克隆、表達與抗菌活性.pdf

1、最近，一類新型的凝集素tachylectin-related蛋白在從古老的海綿到脊椎動物硬骨魚類的很多物種中被鑒定，并且研究發(fā)現(xiàn)其在生物的先天性免疫中發(fā)揮重要作用。但是，關(guān)于文昌魚的類tachylectin卻未見報道。文昌魚是現(xiàn)存的與脊椎動物原始祖先最接近的頭索動物，一直被認為是研究脊椎動物起源和進化的模式動物。本文從成體文昌魚(Branchiostoma belcheri)消化道cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)了一個表達序列標簽，經(jīng)鑒定與tachy

2、lectin-related基因的同源性較高，因而進一步去克隆具有完整編碼框的tachylectin-related基因(BbTL)，并對其結(jié)構(gòu)、進化、表達和功能進行了研究。 首先，從文昌魚cDNA文庫中克隆到全長為1236bp的BbTL cDNA，其最大開放閱讀框編碼305個氨基酸的蛋白質(zhì)(理論分子量為32kDa)，含有一個N末端的信號肽，屬于分泌型蛋白。該cDNA編碼的蛋白(BbTL)包含有tachylectin-relat

3、ed蛋白的典型結(jié)構(gòu)-6個含有兩個短的共有序列GXXWXpI(V)XGXLK和WGVNSNDpIY(F)的串聯(lián)重復(fù)。將BbTL同其他taehylectin-related蛋白進行序列比對和系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn)，BbTL與其他tacitylectin-related蛋白一樣，其核心結(jié)構(gòu)都相當保守；BbTL與無脊椎動物如水螅、鱟、海綿和多頭絨泡菌中發(fā)現(xiàn)的tachylectin-related蛋白有更高的同源性，而與脊椎動物中的此類蛋白同源性低一些

4、。 其次，我們還研究tachylectin-related基因在文昌魚中的表達情況。Northern結(jié)果顯示，BbTL的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為一條帶，大小為1200bp左右，與從文昌魚中克隆的BbTL eDNA的大小基本一致。切片原位雜交分析表明，BbTL在成體組織中呈組織特異性表達，在肝盲囊和后腸中的表達量最高。用細菌內(nèi)毒素LPS處理文昌魚后，在腸中BbTL，基因表達水平迅速升高，說明BbTL可能和其他tachylectin-relate