青島文昌魚肝細(xì)胞核因子BbHNF-3-1、BbHNF-3-2的克隆與表達(dá).pdf

1、肝細(xì)胞核因子(hepatocyte nuclear factor，HNF)是調(diào)節(jié)肝臟內(nèi)基因特異性表達(dá)的一類轉(zhuǎn)錄因子，在肝臟、胰臟等與代謝有關(guān)的器官中較多表達(dá)，HNF家族主要包括CCAATP增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBP)、HNF-1、HNF-3、HNF-4、D結(jié)合蛋白、HNF-6等六大類這些轉(zhuǎn)錄因子及其相互作用構(gòu)成的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，精確地控制著肝臟的發(fā)育和肝細(xì)胞的功能。肝細(xì)胞核因子3(HNF-3)基因編碼蛋白在調(diào)節(jié)新陳代謝以及代謝組織像肝臟、

2、胰臟的分化中起著關(guān)鍵作用。 文昌魚是無脊椎動(dòng)物進(jìn)化到脊椎動(dòng)物的過渡類型的典型代表，一直被認(rèn)為是研究脊椎動(dòng)物起源和進(jìn)化的模式動(dòng)物。本文從青島文昌魚(Branchiostoma belcheritsingtauense)消化道cDNA文庫(kù)中，分離到具有完整編碼框的hepatocyte nuclearfactor3-1、3-2基因(BbHNF-3-1、BbHNF-3-2)，并對(duì)其序列特征、進(jìn)化地位、克隆、生長(zhǎng)激素(GH)的調(diào)控下基因

3、的表達(dá)水平變化等方面進(jìn)行了研究。 首先，利用兼并引物和RACE技術(shù)克隆得到了具有完整編碼框的文昌魚的肝細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子BbHNF-3-1、BbHNF-3-2，并利用生物信息學(xué)方法對(duì)其基因結(jié)構(gòu)及系統(tǒng)進(jìn)化地位進(jìn)行分析。其中BbHNF-3-1 cDNA的最大開放閱讀框編碼404個(gè)氨基酸，BbHNF-3-2 cDNA的最大開放閱讀框編碼445個(gè)氨基酸。將BbHNF-3-1、BbHNF-3-2同其他HNF-3蛋白進(jìn)行序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)

4、現(xiàn)，它們和其它物種的HNF-3基因家族的成員一樣都包含一個(gè)110個(gè)氨基酸的DNA結(jié)合區(qū)，它位于HNF-3蛋白的中心位置。這個(gè)DNA結(jié)合區(qū)域由3個(gè)α螺旋和2個(gè)大環(huán)或者稱為翼的這樣幾個(gè)部分組成，所以將其命名為翼狀螺旋的DNA結(jié)合區(qū)，它可以結(jié)合到肝細(xì)胞特殊基因的調(diào)控區(qū)序列上，調(diào)控肝細(xì)胞功能基因表達(dá)。 哺乳動(dòng)物的肝臟是HNF-3基因的主要合成器官，其他臟器如脾、腎、心、腸、肺、腦等也有合成。長(zhǎng)期以來，文昌魚的肝盲囊一直被認(rèn)為是脊椎動(dòng)物

5、肝臟的前體。利用Northern blot技術(shù)檢測(cè)BbHNF-3在mRNA水平上在成體文昌魚中的組織表達(dá)模式，結(jié)果表明BbHNF-3基因在肝盲囊表達(dá)量較高，在后腸、鰓中也有少量表達(dá)，而在精巢、卵巢、肌肉、神經(jīng)管和脊索沒有雜交信號(hào)?？梢奌NF-3基因在成體文昌魚組織中呈組織特異性表達(dá)。 用生長(zhǎng)激素(GH)處理文昌魚后，在肝盲囊中BbHNF-3-1的表達(dá)量沒有顯著變化，BbHNF-3-2的表達(dá)水平迅速升高，說明GH對(duì)BbHNF-3