PTPN12在不同分子亞型乳腺癌中的特異性表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、研究背景:
　　 乳腺癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。有資料顯示，在美國(guó)，2011年新增的乳腺癌病例數(shù)達(dá)23萬(wàn)，成為女性惡性腫瘤的首位;另有近4萬(wàn)婦女死于乳腺癌。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)乳腺癌發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7％-10％，女性乳腺癌的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)。在過(guò)去10年間，上海、北京和深圳等一些大城市乳腺癌發(fā)病率大幅上升，甚至已經(jīng)占女性惡性腫瘤之首。乳腺癌嚴(yán)重干擾了女性的正常生活，影響著女性的身心健康，甚至危及生命。長(zhǎng)期以來(lái)，如何有效

2、地預(yù)防和治療乳腺癌一直成為目前腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)。
　　 隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)在乳腺癌研究領(lǐng)域的不斷發(fā)展和應(yīng)用，人們逐漸發(fā)現(xiàn)乳腺癌具有高度異質(zhì)性的特點(diǎn)，各乳腺癌患者之間存在明顯的個(gè)體差異。人們通過(guò)基因表達(dá)譜的類型將乳腺癌分成了各種分子亞型。不同分子亞型的乳腺癌具有不同的生物學(xué)行為及治療敏感性。根據(jù)乳腺癌患者的臨床分期，同時(shí)結(jié)合腫瘤的分子亞型對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行相應(yīng)的個(gè)體化治療已經(jīng)成為乳腺癌治療領(lǐng)域中一種非常重要的治療模式。目前，人們根據(jù)

3、雌激素受體(estrogen receptor，ER)和孕激素受體(progesterone receptor，PR)的表達(dá)情況，以及是否存在表皮生長(zhǎng)因子受體2(the epidermal growth factor receptor-2，HER-2)的擴(kuò)增/過(guò)表達(dá)將乳腺癌分為不同的分子亞型。其中，ER和PR均表達(dá)陰性，同時(shí)不存在HER-2過(guò)表達(dá)的乳腺癌被稱為“三陰”型乳腺癌（triple negative breast cancer，

4、TNBC），其在所有乳腺癌病例中所占比例約為20％。人們對(duì)“三陰”型乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制仍缺乏了解。在生物學(xué)行為上，“三陰”型乳腺癌其具有更好的侵襲性，更易發(fā)生復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后更差。在臨床工作中，“三陰”型乳腺癌患者因缺乏針對(duì)性的治療而成為預(yù)后最差的分子亞型。
　　 在細(xì)胞正常的進(jìn)行生長(zhǎng)、增殖和凋亡過(guò)程中，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路起著非常重要的調(diào)控作用。一旦調(diào)控失衡就有可能引起細(xì)胞異常生長(zhǎng)和持續(xù)的分裂。維持蛋白的磷酸化和去磷酸化修

5、飾之間的平衡是細(xì)胞正常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要組成部分。在這一過(guò)程中，目前研究較多的是受體酪氨酸激酶(PTKs)和酪氨酸磷酸酶(PTPs)。酪氨酸激酶與酪氨酸磷酸酶在細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸化水平的調(diào)節(jié)過(guò)程中起著非常重要的作用。有學(xué)者認(rèn)為在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中存在細(xì)胞內(nèi)磷酸化水平的失衡，即酪氨酸磷酸酶活性降低及/或酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，從而導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞的惡性生長(zhǎng)、分化和增殖。
　　 表皮生長(zhǎng)因子受體是酪氨酸激酶中最大的一類酶聯(lián)受體。表皮生長(zhǎng)因子

6、受體家族（也稱為ErbB受體家族）包括EGFR(HER1/ErbB-1)、HER2(ErbB-2/neu)、HER3(ErbB-3)以及HER4(ErbB-4)這四種相關(guān)的受體酪氨酸激酶。通過(guò)與配體以特異并高親和力的形式結(jié)合，原本以無(wú)活性的單體形式存在于細(xì)胞膜表面的受體便形成同源二聚體或者異源二聚體，隨后受體酪氨酸激酶被激活而啟動(dòng)下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等過(guò)程。表皮生長(zhǎng)因子的過(guò)度激活可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)分裂增殖信號(hào)的不斷傳遞，

7、將信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)膜和細(xì)胞核，最終引起細(xì)胞持續(xù)分裂、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、腫瘤的血管生成，因此常與腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良等相關(guān)。
　　 有研究發(fā)現(xiàn)14％至90％的乳腺癌組織中存在EGFR的過(guò)度表達(dá)。EGFR表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞分化差、侵襲性更高、具有淋巴結(jié)早期轉(zhuǎn)移的傾向、且對(duì)內(nèi)分泌治療產(chǎn)生抵抗。人們發(fā)現(xiàn)有20％～30％的乳腺癌患者存在HER-2的高表達(dá)或基因擴(kuò)增。Her-2高表達(dá)的乳腺癌惡性程度高，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率高，患者的預(yù)后差。目前，針對(duì)

8、HER-2高表達(dá)乳腺癌的抗腫瘤分子靶向藥物治療曲妥珠單抗(Trastuzumab)在臨床中的應(yīng)用已取得了令人鼓舞的療效。
　　 人們對(duì)酪氨酸激酶進(jìn)行系統(tǒng)研究的同時(shí)，對(duì)酪氨酸磷酸酶的了解也在不斷進(jìn)行。第一個(gè)具有酪氨酸特異性的磷酸酶于1980年被發(fā)現(xiàn)。在接下來(lái)的20年中，PTPs家族的成員已增加到至少107個(gè)，人們對(duì)于酪氨酸磷酸酶在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用已經(jīng)有了越來(lái)越深入的認(rèn)識(shí)。
　　 蛋白酪氨酸磷酸酶PTPN12（又

9、稱PTP-PEST）于1993年由Yang運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方法從人骨骼肌中發(fā)現(xiàn)。人類PTPN12基因位于染色體7q11.23，其編碼的蛋白大小約60KD，含有510個(gè)氨基酸。2001年，Dominique發(fā)現(xiàn)PTPN12通過(guò)誘導(dǎo)Shc，Pyk2，F(xiàn)ak and Cas的去磷酸化和使RAS-MAPK通路失活，最終對(duì)淋巴細(xì)胞的活化起到負(fù)性調(diào)控作用。隨后有研究發(fā)現(xiàn)PTPN12在結(jié)腸癌、卵巢癌以及成纖維細(xì)胞中調(diào)控細(xì)胞的粘附、遷移和運(yùn)

10、動(dòng)，進(jìn)而認(rèn)為其有潛在的調(diào)控腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用。2011年，Sun發(fā)現(xiàn)PTPN12可以有效抑制乳腺上皮細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化。PTPN12通過(guò)負(fù)性調(diào)控以EGFR和HER-2為中心的酪氨酸磷酸酶?jìng)鲗?dǎo)通路而發(fā)揮抑制細(xì)胞惡性增殖的作用。多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑的聯(lián)合使用可以使“三陰”型乳腺癌細(xì)胞系的增殖能力和成瘤能力嚴(yán)重受損。同時(shí)，大量“三陰”型乳腺癌細(xì)胞和腫瘤組織中均存在PTPN12的缺失表達(dá)。在PTPN12缺失的乳腺癌細(xì)胞中，一旦恢復(fù)PTPN12的

11、功能，細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移潛能就能受很大程度的破壞。因此，PTPN12被認(rèn)定為“三陰”型乳腺癌中的新型抑癌基因。
　　 目的:
　　 對(duì)于中國(guó)人群中PTPN12與乳腺癌的關(guān)系，目前還沒(méi)有出現(xiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)采用免疫組織化學(xué)染色的方法，探討PTPN12蛋白在中國(guó)人群中不同分子亞型乳腺癌中的表達(dá)情況，分析PTPN12的表達(dá)與受體酪氨酸激酶EGFR和Her-2的表達(dá)是否相關(guān)，并探討PTPN12蛋白的表達(dá)與乳腺癌患者的臨床病理特征的

12、關(guān)系，同時(shí)結(jié)合臨床隨訪資料進(jìn)行回顧性分析PTPN12的表達(dá)與患者總生存時(shí)間之間的關(guān)系。為進(jìn)一步研究PTPN12基因在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用、機(jī)制奠定基礎(chǔ);為乳腺癌的預(yù)后判斷以及治療靶點(diǎn)的選擇提供初步的證據(jù)。
　　 方法:
　　 1.PTPN12在不同分子分型乳腺癌組織中的表達(dá)
　　 收集2005年至2009年南方醫(yī)院收治的84例乳腺癌患者的病理及臨床資料。所有患者均已知ER、PR以及HER-2的表達(dá)情況。其

13、中有“三陰”型乳腺癌患者50例，非“三陰”型乳腺癌患者34例，采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)組織中PTPN12的表達(dá)，并分析PTPN12在不同分子分型乳腺癌患者中的表達(dá)情況;
　　 2.PTPN12與分子分型相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　 采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)組織中EGFR的表達(dá)，并分析EGFR在不同分子分型乳腺癌患者中的表達(dá)情況;分析PTPN12的表達(dá)與ER、PR、HER-2以及EGFR的關(guān)系。
　　 3.PT

14、PN12的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系
　　 整理84例乳腺癌患者的發(fā)病年齡、原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)狀態(tài)、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期等臨床病理資料，分析PTPN12蛋白表達(dá)水平與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　 4.PTPN12的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系
　　 分析PTPN12蛋白表達(dá)與乳腺癌患者總生存期的關(guān)系;建立COX回歸模型，對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)與生存期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:
　　 運(yùn)用SPS

15、S13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用以下統(tǒng)計(jì)分析方法:“三陰”型乳腺癌和非“三陰”型乳腺癌中PTPN12的陽(yáng)性表達(dá)率的比較用x2檢驗(yàn);“三陰”型乳腺癌和非“三陰”型乳腺癌中PTPN12的表達(dá)強(qiáng)度差異采用Mann-whitney U非參數(shù)檢驗(yàn)方法;“三陰”型乳腺癌和非“三陰”型乳腺癌中EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率的比較用x2檢驗(yàn);PTPN12與EGFR各表達(dá)水平的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)性分析;PTPN12蛋白表達(dá)的影

16、響因素分析采用logistic回歸分析的方法;對(duì)PTPN12以及各個(gè)臨床病理參數(shù)與乳腺癌患者的總生存時(shí)間之間的關(guān)系采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，對(duì)PTPN12及多個(gè)臨床病理參數(shù)與患者的總生存時(shí)間的關(guān)系進(jìn)行COX回歸分析;以0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 第一章、PTPN12在不同分子分型乳腺癌組織中的表達(dá)
　　 1.PTPN12在乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞漿和（或）

17、細(xì)胞膜中表達(dá)。在50例“三陰”型乳腺癌組織中，PTPN12的各級(jí)表達(dá)強(qiáng)度所占比例分別為:“-”占42.0％(21/50)，“+”占26.0％(13/50)，“++”占28.0％(14/50)，“+++”占4％(2/50)。在34例非“三陰”型乳腺癌組織中，PTPN12的各級(jí)表達(dá)強(qiáng)度所占比例分別為:“-”占20.6％(7/34)，“+”占23.5(8/34)，“++”占29.4％(10/34)，“+++”占26.5％(9/34)。非“三陰

18、”型乳腺癌組織中PTPN12的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于“三陰”型乳腺癌組織(P＜0.05)。在“三陰”型乳腺癌組織中PTPN12的缺失表達(dá)率為42.0％(21/50)。在非“三陰”型乳腺癌組織中PTPN12的缺失表達(dá)率為20.6％(7/34)?！叭帯毙腿橄侔┙M織中PTPN12的缺失表達(dá)率明顯高于非“三陰”型乳腺癌組（P＜0.05）。
　　 2.EGFR在乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和胞漿中表達(dá)。EGFR在“三陰”型乳腺癌中的表達(dá)陽(yáng)性率為76.0

19、％(38/50)。非“三陰”型乳腺癌中PTPN12的表達(dá)陽(yáng)性率為47.1％(16/34)?！叭帯毙腿橄侔┖头恰叭帯毙腿橄侔┲蠩GFR表達(dá)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3.EGFR和PTPN12蛋白的表達(dá)水平具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(rs=-0.264P=0.015)。
　　 4.PTPN12的表達(dá)與HER-2的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(rs=-0.250P=0.022)，PTPN12的表達(dá)與ER

20、的表達(dá)、PR的表達(dá)均不具有明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　 第二章、PTPN12的表達(dá)與臨床病理特征以及患者預(yù)后的關(guān)系
　　 1.logistic回歸分析的結(jié)果顯示PTPN12蛋白的表達(dá)與患者的發(fā)病年齡、HER-2的表達(dá)以及EGFR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P值均小于0.05）。PTPN12的表達(dá)與患者的原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 2.Kaplan-Meier生存分析的

21、結(jié)果顯示PTPN12表達(dá)陽(yáng)性患者的總生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于PTPN12表達(dá)為陰性患者的總生存時(shí)間（P＜0.05）而在“三陰”型乳腺癌患者和非“三陰”型乳腺癌患者兩個(gè)亞組中均未發(fā)現(xiàn)PTPN12的表達(dá)與患者的生存時(shí)間存在顯著關(guān)系(P＞0.05)。
　　 3.運(yùn)用Kaplan-Meier法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果顯示PTPN12的表達(dá)狀態(tài)、患者的臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)影響乳腺癌患者總生存時(shí)間(P＜0.05），而患者的年齡、腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

22、、ER、PR、HER-2、EGFR的表達(dá)對(duì)乳腺癌患者的總生存時(shí)間無(wú)顯著的影響(P＞0.05)。
　　 4.COX多因素回歸分析的結(jié)果顯示PTPN12是影響乳腺癌患者總生存時(shí)間的獨(dú)立因素，PTPN12表達(dá)陽(yáng)性患者生存期長(zhǎng)于PTPN12表達(dá)為陰性的患者（B=-1.043,P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.國(guó)外的研究發(fā)現(xiàn)PTPN12在“三陰”型乳腺癌中的缺失突變率高于其他分子分型腫瘤，而我們的研究結(jié)果也表明中國(guó)

23、人群中PTPN12蛋白的表達(dá)缺失在“三陰”型乳腺癌患者中更常見(jiàn)。因此有理由認(rèn)為PTPN12在“三陰”型乳腺癌中的表達(dá)缺失率更高是一種普遍現(xiàn)象。這一結(jié)果從一個(gè)角度支持PTPN12為“三陰”型乳腺癌中的抑癌基因這個(gè)結(jié)論。PTPN12可能作為抗“三陰”型乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)。
　　 2.PTPN12對(duì)EGFR/HER-2有負(fù)性調(diào)控的作用，也即EGFR/HER-2是PTPN12發(fā)揮抑制腫瘤作用的靶點(diǎn)。針對(duì)EGFR和HER-2等酪氨酸激酶