36例骨髓增生異常綜合征患者SF3B1檢測(cè)突變及其與臨床特征間的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　 骨髓增生異常綜合征(MDS)是一種造血干細(xì)胞克隆性疾病,其形態(tài)和臨床過(guò)程有顯著的異質(zhì)性1。為了解其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制,MDS的分子生物學(xué)改變是其研究的重點(diǎn)。近年來(lái)已發(fā)現(xiàn)MDS患者存在某些基因異常,如TET2,ASXL1,EZH2,IDH1,DNMT3A,TEL/ETV6,RUNX1和TP532。這些基因突變可能參與了MDS的發(fā)生,并為疾病的診斷、預(yù)后分析及靶向治療提供依據(jù)3,4。最近有報(bào)道應(yīng)用下一代測(cè)序方法(nextg

2、enerationsequencing)鑒定出MDS患者存在剪接因子3b亞單位1(SF381)基因突變,突變率約20.3%5-7。并且該突變的發(fā)生與MDS的一個(gè)典型指征即骨髓中出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(RS)有密切相關(guān)性,即近65%的存在RS的MDS患者發(fā)生SF3B1突變5。SF381位于染色體2q33.1上,編碼U2小核核糖核蛋白復(fù)合體(U2snRNP)的核心成分。U2snRNP位于剪接體的催化部位,參與mRNA前體剪接加工而形成成熟的m

3、RNA,從而調(diào)節(jié)剪接變異的多樣性8。
　　 到目前為止,國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)關(guān)于SF3B1突變研究的文獻(xiàn)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立可行的等位基因特異性PCR(AS-PCR)檢測(cè)技術(shù),分別檢測(cè)了36例MDS患者SF381基因的13-15號(hào)外顯子,并對(duì)SF3B1基因突變與MDS分型、臨床特點(diǎn)之間的相關(guān)性及預(yù)后意義進(jìn)行了分析。
　　 方法：
　　 通過(guò)AS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后測(cè)序的方法,檢測(cè)36例MDS患者SF381基因的13-15號(hào)外

4、顯子中的突變發(fā)生情況。36例初診MDS患者骨髓標(biāo)本來(lái)自2011年2月至2012年1月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標(biāo)準(zhǔn),RA型6例,RARS型4例,RCMD型7例,RAEB-Ⅰ型8例,RAEB-Ⅱ型11例。10名正常對(duì)照為我院門診確診無(wú)血液病患者。
　　 主要研究方法為:(1)采集患者及對(duì)照者骨髓2ml,紅細(xì)胞裂解液分離單個(gè)核細(xì)胞,運(yùn)用基因組DNA抽提試劑盒進(jìn)行DNA的抽提;(2)采用等位基因特

5、異性PCR技術(shù)(AS-PCR)擴(kuò)增SF3B1基因,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,所有出現(xiàn)目的條帶患者PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,對(duì)比正常SF3B1基因從而發(fā)現(xiàn)突變異常。(3)通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析SF3B1突變與部分臨床參數(shù)間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.36例MDS患者中檢測(cè)到5例SF381突變,該突變?cè)贛DS患者中的發(fā)生率為13.9%。突變型MDS患者中RARS型2例(4:2),RA型0例,RAE-Ⅰ型0例,RAEB-Ⅱ型1例(

6、11:1),RCMD型2例(7:1)。標(biāo)本4、5、25、28、34號(hào)在第14號(hào)外顯子出現(xiàn)第2098位堿基上A-G突變,為賴氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼?K700E)。標(biāo)本35號(hào)在第15號(hào)外顯子出現(xiàn)第2169位堿基上T-G突變,沒(méi)有發(fā)生氨基酸變化,無(wú)功能蛋白的改變,歸為突變陰性組。10例正常對(duì)照無(wú)一例突變陽(yáng)性。
　　 2.5例SF381基因突變型與31例野生型之間在一般臨床特征上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,如骨髓原始細(xì)胞計(jì)數(shù)(P=0.041)、外周血白

7、細(xì)胞計(jì)數(shù)(P=0.006)、血小板計(jì)數(shù)(P=0.006)。MDS各亞型間SF3Bl突變差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.088),可能與樣本量小有關(guān)。有1例發(fā)生突變的標(biāo)本染色體為復(fù)雜核型,1例標(biāo)本在MDS進(jìn)展至M2b后未檢測(cè)出SF3B1基因突變,因標(biāo)本例數(shù)較少,尚不能分析此突變與MDS發(fā)生染色體變化及轉(zhuǎn)白之間的關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出在MDS患者中存在SF3B1突變,突變率低于國(guó)外相關(guān)報(bào)道。
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