雷帕霉素對人晶體上皮細胞凋亡基因表達和細胞周期之影響的實驗研究.pdf

1、【目的】探討雷帕霉素（rapamycin）對體外培養(yǎng)的人晶體上皮細胞凋亡相關基因蛋白Bcl-2和Bax表達和細胞周期的影響，為臨床上防治后發(fā)性白內(nèi)障開發(fā)新型抑制藥物提供理論依據(jù)。
　　 【材料及方法】取二、三代體外培養(yǎng)的HLECs做RAPA藥物實驗。1．MTT比色測定法：在96孔培養(yǎng)板中將檢測組細胞植入，分為六組，每組設有八個復孔。、分別為只含有細胞及培養(yǎng)液的陰性對照組、含有培養(yǎng)液不含細胞及RAPA的空白對照組、加入含不同濃度雷

2、帕霉素的（20，40，60，80ng/mL)的培養(yǎng)液。經(jīng)藥物作用24、48、72h后用MTT酶聯(lián)免疫檢測儀對各孔實驗組進行吸光光度值檢測。2．流式細胞儀：用藥分組同前，每組作用時間相同，為48h。此后用流式細胞檢測儀對不同濃度組進行細胞周期檢測。3．實時熒光定量PCR：分別設定不含雷帕霉素的對照組以及含不同濃度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四個實驗組。采用SYBR green-Ⅰ染料法檢測細胞Bcl-2和Bax mRN

3、A的表達情況。4．Western-Blot：分別設定不含雷帕霉素的對照組以及含不同濃度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四個實驗組。采用SDS-PAGE電泳法檢測細胞Bcl-2和Bax 蛋白表達情況。
　　 【結(jié)果】1．MTT比色測定：雷帕霉素對人晶體上皮細胞增殖的抑制呈時間、劑量依賴性。2．流式細胞儀檢測細胞周期：雷帕霉素可阻滯人晶體上皮細胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換，使G1期細胞增多，S期細胞減少。3.實時熒光定量PC