丙酮酸鈉與PD-2液腹腔復(fù)蘇對(duì)失血性休克大鼠腸粘膜屏障功能保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：比較丙酮酸鈉與PD-2液腹腔復(fù)蘇對(duì)失血性休克大鼠腸粘膜屏障的保護(hù)作用，從血清學(xué)、形態(tài)學(xué)及蛋白質(zhì)水平探討丙酮酸鈉腹腔復(fù)蘇對(duì)失血性休克大鼠腸粘膜屏障功能的保護(hù)作用及其在腹腔復(fù)蘇中的優(yōu)勢(shì)。
　　 方法：健康清潔級(jí)雄性SD大鼠，40只，隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組(對(duì)照組)、失血性休克模型組(休克組)，復(fù)方氯化鈉(林格氏液)靜脈復(fù)蘇+PD-2液腹腔復(fù)蘇組(PD-2液組)，復(fù)方氯化鈉(林格氏液)靜脈復(fù)蘇+丙酮酸鈉腹腔復(fù)蘇組(丙酮酸鈉組)，

2、每組10只。對(duì)照組依次行右頸總動(dòng)脈、右股靜脈、左股動(dòng)脈插管及全身肝素化。休克組在對(duì)照組基礎(chǔ)上經(jīng)左股動(dòng)脈放血，制備失血性休克大鼠模型。PD-2液組、丙酮酸鈉組在休克組基礎(chǔ)上經(jīng)右股靜脈復(fù)蘇，復(fù)蘇液體為放出的血量及2倍量的林格氏液。同時(shí)分別向腹腔內(nèi)注入20ml2.5％PD-2液與20ml丙酮酸鈉。對(duì)照組大鼠插管后2h取材(動(dòng)脈血與小腸標(biāo)本)待測(cè)；休克組大鼠造模后1h取材；PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠復(fù)蘇后1h取材。保持大鼠自由通暢呼吸，用烤燈

3、維持大鼠體溫在37±0.3℃。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間取左股動(dòng)脈血，以自動(dòng)血?dú)夥治鱿到y(tǒng)測(cè)定動(dòng)脈血?dú)?pH、PaCO2、PaO2)。采用分光光度法測(cè)定血漿D-乳酸(D-lactic acid，D-LA)含量，光鏡下觀察各組大鼠小腸粘膜組織形態(tài)改變。用免疫印跡法和免疫組織化學(xué)方法測(cè)定小腸粘膜上皮磷酸化血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(p-VASP)及下游緊密連接結(jié)構(gòu)蛋白ZO-1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：血?dú)夥治鼋Y(jié)果：休克組pH及PaO2水平較對(duì)照組明顯降低

4、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，PaCO2降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；PD-2液組、丙酮酸鈉組較休克組pH水平及PaO2含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，PCO2升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與PD-2液組比較，丙酮酸鈉組pH水平及PO2水平升高更為明顯，二組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PCO2變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。D-LA含量結(jié)果：較對(duì)照組比較，休克組D-LA含量明顯升高

5、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；PD-2液組、丙酮酸鈉組較休克組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與PD-2液組比較，丙酮酸鈉組D-LA降低更明顯，二組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。光鏡下對(duì)照組大鼠小腸粘膜層絨毛排列整齊，無水腫，粘膜下血管充盈。休克組大鼠小腸粘膜層絨毛高度水腫，粘膜下血管塌陷，固有層內(nèi)腺體灶性區(qū)域壞死，并大片粘膜絨毛壞死、脫落，缺損；PD-2液組和丙酮酸鈉組小腸粘膜破壞較休克組明顯減輕，見小腸粘膜層

6、絨毛輕度水腫、少量片狀壞死、脫落，粘膜下血管輕度塌陷；丙酮酸鈉組大鼠小腸粘膜絨毛水腫、倒伏及壞死程度均好于PD-2液組，粘膜下血管較充盈。小腸上皮損傷指數(shù)評(píng)分：丙酮酸鈉組高于休克組及PD-2液組(P<0.01 or P<0.05)。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示休克組、PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠小腸粘膜Z0.1蛋白水平較對(duì)照組低(P<0.01)，p-VASP蛋白水平均較對(duì)照組高(P<0.01)；與休克組相比較，PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠小腸

7、粘膜ZO-1蛋白含量均增高(P<0.01)，p-VASP蛋白含量均降低(P<0.01)，其中丙酮酸鈉組小腸粘膜ZO-1蛋白含量增高更明顯(P<0.05)，p-VASP蛋白表達(dá)降低更明顯(P<0.05)；而丙酮酸鈉組與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫組化結(jié)果顯示各組結(jié)果與免疫印跡基本一致。
　　 結(jié)論：
　　 1.靜脈復(fù)蘇加腹腔復(fù)蘇可顯著降低失血性休克大鼠血漿D-LA含量，增加PO2水平，有助于糾正酸中毒，