消減抑制雜交分離差異甲基化片段方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：建立分離基因組DNA中差異甲基化片段的消減抑制雜交技術(shù)，初步探討其在分離肝癌細(xì)胞系中不同DNMTs表達(dá)抑制后所影響甲基化序列的應(yīng)用。 方法：根據(jù)基因組甲基化位點(diǎn)的序列特點(diǎn)，設(shè)計(jì)了消減抑制雜交方案，并且對實(shí)驗(yàn)條件和體系進(jìn)行了優(yōu)化。這樣可以提高分離差異甲基化片段的特異性。抑制性消減雜交有效濾出雜余片段，多級磁珠的分離可以提高差異片段的檢出率。應(yīng)用消減抑制雜交方法在DNMTs表達(dá)抑制的肝癌細(xì)胞系中分離不同DNMTs可能的作用片段

2、。初步嘗試此方法在肝癌患者外周血基因組分離差異甲基化片段，并以NCBI BLAST數(shù)據(jù)庫分析所獲各組片段的序列特點(diǎn)及在基因組中分布規(guī)律。 結(jié)果：運(yùn)用消減雜交、抑制性PCR、磁珠分離原理建立了分離差異甲基化片段的消減抑制雜交技術(shù)，可以應(yīng)用在基因組范圍內(nèi)分離差異甲基化片段。在肝癌細(xì)胞系基因中可以篩選到不同DNMTs可能的作用片段，在肝癌病例外周血基因組DNA中可能分離出差異甲基化片段。所獲片段在基因組中分布較廣泛，集中存在于重復(fù)序列