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文檔簡介
1、番茄因其富含番茄紅素等一系列重要營養(yǎng)物質(zhì),是一種備受歡迎的世界性經(jīng)濟作物。但其成熟后極易腐爛變質(zhì),不耐運輸和儲藏,由此造成了重大的經(jīng)濟損失。因此如何延長果實貨架期及保證其關(guān)鍵品質(zhì)一直是食品領(lǐng)域中重要的研究方向。目前,乙烯(C2H4)被認(rèn)為是促進(jìn)番茄成熟的重要植物激素,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其受體(LeETR3)與果實成熟密切相關(guān)。另一方面,番茄紅素β-環(huán)化酶(Lcyb)是代謝番茄紅素形成具環(huán)類胡蘿卜素的關(guān)鍵酶,對于番茄紅素水平調(diào)控至關(guān)重要。
2、r> 因此本文第一部分試圖運用生物學(xué)方法CRISPR/Cas9技術(shù)同時突變LeETR3與Lcyb以期達(dá)到延遲果實成熟并保證其番茄紅素含量的目的。本實驗首先構(gòu)建了含潮霉素(Hyg)抗性的CRISPR/Cas9Pubi∷AtU∷LeETR3/Lcyb共敲除載體,但在后續(xù)實驗中發(fā)現(xiàn)番茄AC對Hyg極其敏感,且Hyg篩選AC陽性愈傷組織的最適濃度范圍在5 mg/L以下,不易篩選。因此本文又構(gòu)建了含卡那(Kana)抗性的CRISPR/Cas9P
3、35s∷AtU∷LeETR3/Lcyb,CRISPR/Cas9∷AtU∷LeETR3多靶點敲除載體,并將其成功轉(zhuǎn)入番茄中,以此得到了轉(zhuǎn)基因株系。本研究將CRISPR/Cas9多基因多靶點敲除技術(shù)成功應(yīng)用到番茄中,同時也為進(jìn)一步研究LeETR3和Lcyb在番茄保藏及品質(zhì)中的作用打下基礎(chǔ)。
眾所周知,獼猴桃是大眾非常喜愛的水果,其富含抗壞血酸(AsA)等抗氧化物質(zhì)。AsA對維持人類正常生長和健康具有重要意義。單脫氫抗壞血酸還原酶(
4、MDHAR)可以將單脫氫抗壞血酸(MDHA)還原成AsA。測序結(jié)果發(fā)現(xiàn),在獼猴桃中有7個基因編碼MDHAR,但目前對獼猴桃中MDHAR的功能尚不明確。因此本文第二部分欲利用過表達(dá)獼猴桃MDHAR的轉(zhuǎn)基因株系初步探究其功能。本實驗對純合的OE MDHAR1,OE MDHAR2和OE MDHAR6轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn):MDHAR1和MDHAR2在轉(zhuǎn)錄水平均能表達(dá)且具有MDHAR酶活功能,并促進(jìn)了總AsA的合成。尤其是OE MDHAR2-1
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