肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的HLX1基因的表達(dá)及侵襲能力的影響.pdf

1、[研究背景及目的]
　　 滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲是被許多細(xì)胞因子緊密控制復(fù)雜多變的過程。轉(zhuǎn)錄因子在滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤(rùn)過程起著重要的作用。但是目前對(duì)轉(zhuǎn)錄因子的下游效應(yīng)基因,以及對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)的上游細(xì)胞因子知之甚少。
　　 同源異型盒基因是一類重要的調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞分化和形態(tài)發(fā)育的轉(zhuǎn)錄因子基因家族,其中HLX1基因與胚胎來源細(xì)胞和造血系細(xì)胞的增殖、分化行為密切相關(guān)。1997年Quinn首次從人類胎盤cDNA文庫(kù)中分離出來HLX1,發(fā)現(xiàn)其主要表

2、達(dá)于具有增殖能力的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞。近年來研究陸續(xù)表明,HLX1基因在正常胎盤形成尤其是滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖及分化中起起重要作用。病理妊娠如特發(fā)性胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限(FGR)的胎盤中HLX1基因表達(dá)水平明顯降低。我們前期實(shí)驗(yàn)運(yùn)用RNAi技術(shù)抑制滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR-8/Svneo中HLX1基因的表達(dá),發(fā)現(xiàn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖和侵襲能力明顯受到抑制。2007年Rajaraman等體外研究發(fā)現(xiàn)HLX1是集落刺激因子1(CSF-1)的一個(gè)下游效應(yīng)基因,CSF-1

3、可以通過上調(diào)HLX1基因的表達(dá)而促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖。HGF是一種具有肝素結(jié)合特性的酸性蛋白質(zhì),妊娠婦女血清中的HGF主要來自胎盤,以旁分泌的途徑作用于鄰近的c-met受體,對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞的功能進(jìn)行調(diào)節(jié)。HGF能夠保護(hù)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生凋亡、形態(tài)形成,促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)子宮螺旋動(dòng)脈的浸潤(rùn),是維持妊娠的必要因子。
　　 在本研究中我們猜測(cè)HLX1是HGF的下游效應(yīng)基因,HGF通過對(duì)其調(diào)節(jié)進(jìn)而對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力進(jìn)行調(diào)節(jié)。
　　 [

4、方法]
　　 1.復(fù)蘇、培養(yǎng)人早孕期胎盤絨毛膜外滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR-8/Svneo至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用不同濃度HGF(0、10、20、50、100 ng/mL)處理細(xì)胞48 h,設(shè)0濃度組作為對(duì)照組。
　　 2.用HLX1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后繼續(xù)以20 ng/mL HGF刺激48 h,分空白對(duì)照組(MC)、siRNA+HGF組、MC+HGF組3個(gè)實(shí)驗(yàn)組。
　　 3.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和蛋白印跡法測(cè)定

5、各組細(xì)胞中HLX1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 4.應(yīng)用明膠酶譜測(cè)定細(xì)胞上清中MMP-2、MMP-9的表達(dá)。
　　 5.細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn):應(yīng)用Tramwell小室檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組HTR-8/Svneo細(xì)胞穿透人工重組基底膜的能力。各組HTR-8/Svneo細(xì)胞以無血清培養(yǎng)液重懸并以相同數(shù)量接種于包被有Matrigel基質(zhì)膠的小室上室,下室加入20％FCS的培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)24 h,40倍鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)。

6、r>　　 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示定量資料數(shù)據(jù),組間比較采用單因素方差分析(ANOVA),認(rèn)為P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.HGF處理組細(xì)胞HLX1 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較上調(diào)了90％～475％(P＜0.01),且與HGF呈劑量依賴性;20 ng/mE HGF使HLX1蛋白表達(dá)水平上調(diào)(156.7±6.4)％,P＜0.01。

7、>　　 2.siRNA+HGF組與MC組比較,細(xì)胞HLX1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別下降(54.57±0.31)％及(68.44±2.48)％,P＜0.01。
　　 3.20 ng/mL HGF處理組細(xì)胞其上清MMP-2表達(dá)水平與對(duì)照組比較上調(diào)(394.6±2.9)％,P＜0.01;siRNA+HGF組與MC組比較MMP-2表達(dá)水平下降(81.5±0.6)％,P＜0.01。
　　 4.20 ng/mL HGF處理的

8、HTR-8/Svneo細(xì)胞穿過Matrigel的細(xì)胞數(shù)為(71±5)個(gè),與對(duì)照組(50±3)個(gè)比較侵襲能力明顯增強(qiáng)(P＜0.01):siRNA+HGF組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少為(20±4)個(gè),MC組為(43+3)個(gè),兩組之間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 HGF可有效上調(diào)人早孕期胎盤絨毛膜外滋養(yǎng)細(xì)胞HTR-8/Svneo中HLX1基因的表達(dá),HLX1基因表達(dá)水平升高可以顯著促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。