鉤吻素子對C57BL-6小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療作用.pdf

1、目的：觀察鉤吻素子對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（CIA）小鼠熱痛敏、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)炎指數(shù)及后足踝關(guān)節(jié)組織病理變化的影響，明確鉤吻素子對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療作用，并探討鉤吻素子抗RA與小鼠脾臟CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（Treg細胞）數(shù)量及血清轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）表達水平的關(guān)系。
　　方法：將雞Ⅱ型膠原和等量完全弗氏佐劑充分乳化，于C57BL/6小鼠尾根部皮內(nèi)注射100μL，第21天重復(fù)注射等量乳化劑建立CIA小鼠模型。

2、選用造模成功的小鼠，隨機分為模型組、甲氨蝶呤組和鉤吻素子高、中、低劑量處理組，未免疫小鼠設(shè)為對照組；從初次免疫后第23天起，鉤吻素子高、中、低處理組分別灌胃給予鉤吻素子10mg/kg、2mg/kg、0.4mg/kg，每天1次，連續(xù)10天，動態(tài)觀察小鼠后足熱縮足反射潛伏期、關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)等指標的變化。選用造模成功的小鼠，隨機分為模型組鉤吻素子高劑量（10mg/kg）處理組、鉤吻素子低劑量(0.4mg/kg)處理組、甲氨蝶呤組（2m

3、g/kg），未免疫小鼠設(shè)為對照組，同上方案灌胃給藥，于最后一次灌胃給藥3小時后處死小鼠，取各組小鼠后足踝關(guān)節(jié)，行HE染色觀察；采集小鼠血清，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測抗CⅡ抗體IgG1以及TGF-β的含量;摘取小鼠脾臟，流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟中 CD4+ CD25+ Foxp3+Treg細胞所占CD4+T細胞的百分率。
　　結(jié)果：與對照組小鼠相比，模型組小鼠出現(xiàn)顯著的熱痛敏，其關(guān)節(jié)腫脹度和關(guān)節(jié)炎指數(shù)顯著升高，HE染色顯示后足

4、踝關(guān)節(jié)有明顯炎癥細胞浸潤，可見關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞與血管翳形成，血清抗CⅡ抗體IgG1水平也顯著升高；鉤吻素子顯著緩解模型小鼠熱痛敏，減弱其關(guān)節(jié)腫脹度，降低其關(guān)節(jié)炎指數(shù)，下調(diào)其血清抗 CⅡ抗體IgG1的水平，改善模型鼠足踝關(guān)節(jié)病變，包括炎癥細胞侵潤及血管翳等均少于模型組小鼠，提示鉤吻素子對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具有顯著的治療作用。流式細胞檢測結(jié)果顯示，CIA模型組小鼠脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞占CD4+T細胞百分率顯