魚藤組織培養(yǎng)與魚藤素提取分離的研究.pdf

1、魚藤素是植物中最常見的魚藤酮類化合物之一,近年發(fā)現(xiàn)其具有強抗癌活性,在預防及治療肺癌兩方面均具有潛在的應用前景。本研究應用生物技術方法對魚藤的嫩莖、葉進行組織培養(yǎng),并從愈傷組織中提取和分離出魚藤素,同時對魚藤素的還原反應進行初步探討。實驗結果如下:
　　 1.魚藤的組織培養(yǎng)條件優(yōu)化
　　 比較0.1％氯化汞和2％次氯酸鈉不同滅菌時間對組培的影響,并探討不同pH值和激素濃度組合對魚藤莖、葉組織培養(yǎng)的影響。結果表明:魚藤莖、

2、葉組織培養(yǎng)適宜條件為:采用2％次氯酸鈉滅菌外植體14min,培養(yǎng)基的pH值為6.0,激素濃度為2,4-D2.0mg/mL、6-BA1.0mg/mL。此時組織培養(yǎng)的死亡率和污染率均不高于16％;愈傷組織的誘導率最高95％;莖、葉愈傷組織收獲量也最多,分別為3.9522g、3.5944g。
　　 2.魚藤素的提取條件優(yōu)化
　　 采用超聲波輔助浸提、振蕩提取、冷凍濃縮在貢丸水煮液回收中的應用三種方法從愈傷組織中提取魚藤素,并與

3、魚藤各個部位進行比較。結果表明:在相同條件下,提取魚藤素的適宜方法為超聲波輔助浸提5min,魚藤素提取率為10.31％。組培到60d時,愈傷組織中魚藤素含量最高為51.40％;提取率比較結果為根＞根瘤＞愈傷組織＞葉＞莖,根的提取率最高為9.29％,愈傷組織的提取率為8.23％。
　　 3.魚藤素的分離條件優(yōu)化
　　 采用硅膠柱層析(流動相為石油醚.乙酸乙酯梯度洗脫)和薄層層析分離,應用HPLC(反相C18柱、流動相甲醇-

4、水(66:34)、流速0.5ml/min、柱溫30℃)檢測。結果顯示:當硅膠柱層析以流動相為石油醚:乙酸乙酯=5:1時,魚藤素分離效果好,含量為96.76％:薄層層析以展開劑為丙酮:氯仿:石油醚=1:2:7,當Rf2=0.31時,能夠較好的分離出魚藤素,魚藤素含量為93.33％。
　　 4.還原衍生條件的探討
　　 試樣溶解于甲醇中,與硼氫化鈉發(fā)生還原反應,通過高效液相色譜法檢測分析。實驗表明:在氫氧化鈉條件下,加熱到8