魚藤素靶向誘導NPMc+AML細胞分化的體內(nèi)、體外研究.pdf

1、目的：核磷蛋白是一種具有多種生物學功能的磷酸蛋白，廣泛存在于細胞核內(nèi)，不斷穿梭于核仁、核質和胞漿之間。約1/3的急性髓系白血?。ˋML）患者存在NPM1突變，突變的NPM1蛋白異常聚集于胞漿，是NPMc+AML（NPM1突變型AML）發(fā)病的重要原因。魚藤素是從植物中提取的具有抗腫瘤作用的天然單體藥物。本文體外實驗部分研究魚藤素（deguelin）對NPMc+AML原代細胞的誘導分化作用，體內(nèi)實驗部分研究魚藤素對NPMc+人源化白血病鼠細

2、胞的誘導分化作用，探討魚藤素的抗腫瘤機制，為AML的治療提供新的靶向藥物。
　　方法：將NPMc+AML患者的骨髓單個核細胞與魚藤素共同培養(yǎng)，流式細胞術檢測其分化指標（CD11b、CD14）的變化；Western blot免疫印跡技術檢測NPM1突變蛋白、總NPM1蛋白及與分化相關的蛋白（SIRT1、p21、HDAC1、C/EBPβ和G-CSFR）水平的變化。將人的急性髓系白血病細胞系OCI/AML3（NPM1突變型）和OCIM2

3、（NPM1野生型）分別接種至NOD/SCID小鼠，造模成功后，予以魚藤素處理，檢測分化指標和NPM1突變蛋白及總NPM1蛋白的變化，并觀察小鼠的生存期。觀察魚藤素對正常小鼠的毒性作用，并確定小鼠對魚藤素的最大耐受劑量。
　　結果：（1）魚藤素可誘導NPM1突變型人白血病細胞分化：NPM1突變型人原代白血病細胞分化比例為：對照組vs16nM魚藤素組：CD11b（4.63％±2.28%vs36.06%±20.8%）（P＜0.05）；C

4、D14(6.13%±3.25%vs59.33%±23.98%)（P＜0.05），而NPM1野生型人原代白血病細胞的CD11b與CD14無明顯升高（P＞0.05）。
　?。?）在NPM1突變型人白血病細胞中，魚藤素顯著下調NPM1突變蛋白和總NPM1蛋白的表達水平（P＜0.05），而不能改變NPM1野生型人白血病細胞總NPM1蛋白蛋白的表達（P＞0.05）。
　?。?）在NPM1突變型人白血病細胞中，魚藤素顯著下調分化相關蛋白

5、SIRT1、p21和HDAC1蛋白的表達（P＜0.05），升高C/EBPβ和G-CSFR蛋白水平（P＜0.05）；但是在NPM1野生型人白血病細胞中，上述蛋白無變化（P＞0.05）。
　?。?）急性髓系白血病細胞系OCI/AML3（NPM1突變型）和OCIM2（NPM1野生型）均可成功建立白血病人源化NOD/SCID小鼠模型；第2周和第4周時，NPM1突變型AML鼠外周血中人CD45陽性細胞的比例分別為20.16%±1.04%和6

6、4.54%±12.03%；NPM1野生型AML鼠外周血中人CD45陽性細胞的比例分別為9.38%±3.91%和41.26%±4.11%，說明人源性白血病小鼠外周血中人CD45陽性細胞比例持續(xù)增高(P<0.01)。造模成功需要的時間為2周。
　?。?）魚藤素可引起NPM1突變型白血病鼠細胞分化指標的升高：1mg/kg/day魚藤素組vs對照組：CD11b：72.81%±5.35%vs.15.06%±2.18%（P＜0.01）；CD1

7、4：82.05%±3.05%vs.16.34%±4.15%（P＜0.01）；CD114：52.14%±9.65%vs.5.61%±2.55%（P＜0.05）；而NPM1野生型白血病鼠的細胞分化指標無改變（P＞0.05）。
　?。?）1mg/kg/day魚藤素可以延長NPM1突變型白血病小鼠的生存期（中位生存時間45天），對照組的中位生存時間為32天（P<0.0001)；不同濃度魚藤素處理的NPM1野生型白血病小鼠的生存時間無統(tǒng)計學

8、差異（P＞0.05），1mg/kg/d魚藤素組白血病小鼠的中位生存時間為35天，對照組的中位生存時間為32天（P＞0.05）。
　?。?）1mg/kg/day魚藤素可誘導NPM1突變型白血病小鼠的骨髓細胞分化，魚藤素組vs對照組（2%DMSO）細胞分化的比例：77.01%±1.98%vs36.92±4.99（P＜0.01）；NPM1野生型白血病小鼠的骨髓分化比例無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　?。?）魚藤素可明顯下調NPM

9、1突變型白血病小鼠中NPM1突變蛋白和總NPM1蛋白水平（P＜0.05），而對NPM1野生型白血病小鼠的總NPM1蛋白無明顯影響（P＞0.05）。
　?。?）NPM1突變型白血病鼠細胞中，魚藤素降低SIRT1,p21和HDAC1的表達（P＜0.01），升高C/EBPβ和G-CSFR的蛋白水平（P＜0.01），而在NPM1野生型白血病鼠細胞中，上述蛋白則無顯著性差異（P＞0.05）。
　?。?0）最大耐受劑量（3mg/kg）的