癲癇大鼠海馬TRPC的動態(tài)變化及在BDNF介導(dǎo)的突觸重建中的作用.pdf

1、目的：觀察TRPC蛋白在匹羅卡品致癇大鼠海馬中的動態(tài)表達(dá)，探討其在突觸重建中的作用。
　　 方法：6～8周齡健康雄性SD大鼠108只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=90)和對照組(n=18)。實(shí)驗(yàn)組采用氯化鋰一匹羅卡品腹腔注射法建立顳葉癲癇模型；對照組大鼠腹腔注射等量無菌生理鹽水。實(shí)驗(yàn)組按癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后1天、7天、15天、30天、60天分為5個亞組，每亞組18只大鼠。以上各亞組再分為3個小組，每小組6只大鼠，分別進(jìn)行：①Weste

2、m blot方法檢測TRPC及突觸重建標(biāo)志蛋白Synaptophysin在海馬中的表達(dá)：②Timm染色觀察海馬苔蘚纖維出芽并評分；③免疫熒光雙標(biāo)方法檢測海馬BDNF與TRPC的表達(dá)，尼氏染色觀察海馬病理改變。對照組隨機(jī)分為3個亞組，各亞組6只大鼠，分別進(jìn)行以上三種檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)驗(yàn)組大鼠SE誘發(fā)成功率為88.9％，死亡率為22.2％，模型成功率為66.7％。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組大鼠TRPC蛋白表達(dá)

3、：①TRPC1蛋白表達(dá)量在SE后1d較對照組顯著降低(P<0.01)，7d降至最低，15d開始恢復(fù)但仍然低于正常，30d時顯著上調(diào)(P<0.05)，60d時達(dá)高峰(P<0.01)。②TRPC3蛋白表達(dá)量從SE后7d起進(jìn)行性下降(P<0.01)，60d時降至最低(P<0.01)。③TRPC4蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著增加達(dá)峰值(P<0.01)，7d仍高于正常(P<0.01)，15d顯著下調(diào)(P<0.01)，60d降至最低(P<0.01)。

4、④TRPC5蛋白表達(dá)量從SE后1d起進(jìn)行性下降(P<0.01)，60d時降至最低(P<0.01)。⑤TRPC6蛋白表達(dá)量在SE后1d達(dá)高峰(P<0.01)，其他時間點(diǎn)均顯著高于正常(P<0.01)。
　　 3.Synaptophysin蛋白表達(dá)量在SE后7d、15d、30d、60d顯著增加(7d，P<0.05；15d、30d、60d，P<0.01)，30d達(dá)峰值(P<0.01)。
　　 4.實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬神經(jīng)元缺失以SE

5、后7d和60d最為明顯。除齒狀回顆粒細(xì)胞缺失相對較輕(P<0.05)外，CA區(qū)錐體細(xì)胞和門區(qū)神經(jīng)元均顯著減少(P<0.01)。
　　 5.實(shí)驗(yàn)組大鼠齒狀回內(nèi)分子層在SE后7d出現(xiàn)Timm顆粒，并呈進(jìn)行性增加。
　　 6.兩組各時間點(diǎn)均可檢測到BDNF與TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5、TRPC6在大鼠海馬各區(qū)共表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 TRPC可能參與了苔蘚纖維出芽，BDNF則可能介導(dǎo)了這

6、一過程。
　　 目的：探討干預(yù)BDNF對匹羅卡品致癇大鼠海馬TRPC的表達(dá)及苔蘚纖維出芽的影響。
　　 方法：6～8周齡健康雄性SD大鼠270只，隨機(jī)分為K252a+Pilo組(n=90只)，NS+Pilo(n=90)和K252a+NS組(n=90只)。K252a+Pilo組采用氯化銼-匹羅卡品腹腔注射法建立顳葉癲癇模型，在匹羅卡品注射前3小時予側(cè)腦室注射K252a進(jìn)行干預(yù)；NS+Pilo組大鼠在匹羅卡品注射前3小時予側(cè)

7、腦室注射無菌生理鹽水；K252a+NS組大鼠側(cè)腦室注射K252a，3小時后予腹腔注射無菌生理鹽水。三組均選取腹腔注射后后1天、7天、15天、30天、60天為研究時間點(diǎn)，各時間點(diǎn)18只大鼠，分別進(jìn)行：①Westem blot方法檢測TRPC及突觸重建標(biāo)志蛋白Synaptophysin在海馬中的表達(dá)；②尼氏染色觀察海馬病理改變；③Timm染色觀察海馬苔蘚纖維出芽并評分。
　　 結(jié)果：
　　 1.K252a+Pilo組SE誘發(fā)

8、成功率(83.3％)低于NS+Pilo組(90.7％)，SE誘發(fā)成功后生存狀態(tài)好，死亡率(8％)同樣低于NS+Pilo組(19.3％)。K252a+Pilo組SE誘導(dǎo)所需平均時間(55.84±17.44 min)較NS+Pilo組(27.80士13.58min)長，致癇所需Piio平均劑量(34.84±9.44 mg/kg)較NS+Pilo組(24.80士5.58 mg/kg)大，而Ⅲ—V級發(fā)作的平均持續(xù)時間(12.84±5.44 mi

9、n)較NS+Pilo組(28.20±4.58min)短，終止發(fā)作所需水合氯醛平均總量(3.24±0.44 ml/kg)較NS+Pilo組(3.80±0.54 ml/kg)低，以上各差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　 2.與K252a+NS組相比：K252a+Pilo組TRPC1蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著上調(diào)(P<0.01)，呈進(jìn)行性上升，60d達(dá)高峰；TRPC3蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著下調(diào)(P<0.05)，呈進(jìn)行性下

10、降，60d時降至最低；TRPC4蛋白表達(dá)量在SE后7d、15d、30d、60d顯著下調(diào)(P<0.01)，15d達(dá)最低值；TRPC5蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著上調(diào)(P<0.01)，呈進(jìn)行性升高，60d達(dá)峰值；TRPC6蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著性上調(diào)(P<0.01)，但上調(diào)幅度逐漸減少，30d仍高于K252a+NS組(P<0.01)，60d出現(xiàn)明顯下調(diào)(P<0.01)。與NS+Pilo組相比：K252a+Pilo組各時間點(diǎn)TRPC1、TR

11、PC4、TRPC5蛋白表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.01)：TRPC3蛋白表達(dá)量在SE后1d顯著下調(diào)至最低(P<0.01)，隨后逐漸恢復(fù)，在SE后7d、15d、30d仍下調(diào)(P<0.05或P<0.01)，至60d顯著上調(diào)(P<0.01)；而TRPC6在SE后1d顯著上調(diào)(P<0.05)，呈進(jìn)行性上升，30d達(dá)高峰(P<0.01)，60d顯著下調(diào)(P<0.01)。
　　 3.與K252a+NS組相比，K252a+Pilo組Synapt

12、ophysin蛋白在SE后15d表達(dá)顯著增多(P<0.01)，呈進(jìn)行性上升，至60d達(dá)最高峰(P<0.01)。與NS+Pilo組相比，K252a+Pilo組Synaptophysin蛋白的表達(dá)在SE后1d顯著上調(diào)(P<0.01)，呈進(jìn)行性上升，至60d達(dá)最高峰(P<0.01)。
　　 4.K252a+Pilo組可見海馬神經(jīng)元缺失，以SE后7d和60d最為明顯。除齒狀同顆粒細(xì)胞缺失相對較輕(P<0.05)外，CA區(qū)錐體細(xì)胞和門區(qū)神

13、經(jīng)元均較K252a十NS組顯著減少(P<0.01)。而K252a+Pilo組海馬神經(jīng)元缺失程度較NS+Pilo組則明顯減輕，尤以SE后7d開始差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05或p<0.01)。
　　 5.K252a+Pilo組海馬齒狀回內(nèi)分子層在SE后15d開始出現(xiàn)Timm顆粒，隨后進(jìn)行性增加至本研究終點(diǎn)，與NS+Pilo組相應(yīng)時間點(diǎn)相比H{芽程度顯著減輕(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.干預(yù)BD