HBx基因?qū)NA修復(fù)酶hOGG1，hMYHα及hMTH1表達(dá)的影響及其在L02細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、目的:
　　 1.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)HBx的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型L02/HBx，觀察L02/HBx細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　 2.檢測(cè)L02/HBx中具有致突變作用的DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的含量，同時(shí)觀察修復(fù)8-OHdG的主要DNA修復(fù)酶hOGG1，hMYHα和hMTH1 mRNA表達(dá)的改變，從DNA修復(fù)酶這一新的角度探討HBx在肝細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 1.傳代培養(yǎng)由課題組林松挺前期

2、構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)HBx的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型L02/HBx及對(duì)照組L02和空載體對(duì)照組L02/pcDNA3.1細(xì)胞，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察L02/HBx細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。
　　 2.采用高效液相色譜儀并電化學(xué)檢測(cè)器(HPLC/ECD)測(cè)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株L02/HBx及對(duì)照組細(xì)胞L02和L02/pcDNA3.1中DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG的含量。
　　 3.進(jìn)一步應(yīng)用RT-實(shí)時(shí)PCR定量檢測(cè)DNA修復(fù)酶hOGG1，hMYHαh

3、MTH1 mRNA在L02/HBx，L02/pcDNA3.1和L02細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HBx的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞L02/HBx的克隆形成率(9.80％±0.5[％]，p<0.05)明顯高于L02和L02/pcDNA3.1細(xì)胞(P<0.05)。
　　 2.應(yīng)用HPLC-ECD測(cè)定各組細(xì)胞中8-OHdG的含量，結(jié)果表明與對(duì)照組細(xì)胞相比，L02/HBx細(xì)胞中8-OHdG的含量(7

4、.26±1.94，p<0.05)顯著升高，而對(duì)照組L02/pcDNA3.1與L02細(xì)胞中8-OHdG的濃度無(wú)明顯差異。
　　 3.RT/實(shí)時(shí)PCR定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DNA修復(fù)酶hMTH1在L02/HBx(2.15±0.7463)細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于L02(0.0924±0.0602)和L02/pDNA3.1(0.0813±0.0161)細(xì)胞(p<0.05)，相反DNA修復(fù)酶hMYHα在L02/HBx(0.0313±0.0131)細(xì)胞

5、中的表達(dá)卻明顯低于L02(0.7112±0.0296)和L02/pDNA3.1(0.4042±0.2811)細(xì)胞(p<0.05)，而DNA修復(fù)酶hOGG1 mRNA在各組細(xì)胞中的表達(dá)無(wú)顯著差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 HBx可以通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，加劇DNA氧化損傷，引起具有致癌作用的DNA氧化損傷產(chǎn)物8-OHdG蓄積，使得DNA修復(fù)酶hMTH1表達(dá)反應(yīng)性的上升。HBx同時(shí)下調(diào)DNA修復(fù)酶hMYHα的表達(dá)，從