艾塞那肽對(duì)高脂誘導(dǎo)的L02細(xì)胞FTO表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、背景：
　　非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以肝臟過(guò)量脂肪積聚為特征的疾病，目前被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)。胰島素抵抗(insulin resistance，IR)和氧化應(yīng)激(oxidative stress)是NAFLD發(fā)病的主要病理生理基礎(chǔ)。脂肪量和肥胖相關(guān)基因(fat mass and obesity associa

2、ted gene，F(xiàn)TO)是通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)的與肥胖密切相關(guān)的一個(gè)基因。研究顯示，F(xiàn)TO參與體重調(diào)節(jié)并與胰島素抵抗、糖脂代謝明顯相關(guān)。郭劍津等研究發(fā)現(xiàn)FTO通過(guò)增加肝細(xì)胞氧化應(yīng)激水平促進(jìn)脂質(zhì)沉積，是NAFLD形成的機(jī)制之一[1]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，用高脂飲食制備SD大鼠NAFLD模型時(shí)，隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠肝臟中FTO的表達(dá)水平也相應(yīng)升高，加重了脂質(zhì)代謝紊亂。胰高血糖素樣肽1(glucagon-like peptide-

3、1，GLP-1)作為一類(lèi)新型治療糖尿病的藥物應(yīng)用于臨床時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有改善胰島素抵抗、降低體重的作用，近年來(lái)越來(lái)越多地被用于NAFLD的治療研究中。Shani Ben-Shlomo等研究發(fā)現(xiàn)GLP-1可抑制肝臟脂肪生成和脂質(zhì)沉積，減輕肝臟炎癥反應(yīng)[2]。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路是細(xì)胞內(nèi)一條重要的信號(hào)傳導(dǎo)通路，研究發(fā)現(xiàn)GLP-1可通過(guò)PI3K/Akt通路調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝與增殖凋亡。GLP-1受體激動(dòng)劑艾塞那肽是否通過(guò)

4、PI3K/Akt通路調(diào)節(jié)FTO基因的表達(dá)，進(jìn)而改善脂代謝紊亂，治療NAFLD，目前尚無(wú)這方面的文獻(xiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　探討胰高血糖素樣肽1(GLP-1)受體激動(dòng)劑艾塞那肽對(duì)高脂誘導(dǎo)的人正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞脂肪變性中FTO基因表達(dá)的影響，探索GLP-1治療非酒精性脂肪肝的機(jī)制。
　　方法：
　　體外用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞，采用含50％FBS的RPMI164

5、0培養(yǎng)液誘導(dǎo)L02細(xì)胞脂肪變性，實(shí)驗(yàn)共分為5組:①正常對(duì)照組:培養(yǎng)液FBS的濃度為10％;②高脂組:培養(yǎng)液FBS的濃度為50％;③高脂+艾塞那肽組:高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L艾塞那肽;④正常+艾塞那肽組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L艾塞那肽;⑤高脂+艾塞那肽+PI3K抑制劑組:高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L的艾塞那肽和濃度為50umol/L的PI3K抑制劑LY294002。各組分別干預(yù)48h，應(yīng)用全自動(dòng)生化

6、儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（Triglyceride，TG）的含量及上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)、乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)、堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，ALP)的水平，油紅“O”染色測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂滴情況，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)FT

7、OmRNA的表達(dá)水平，Western blotting檢測(cè)FTO蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.艾塞那肽對(duì)正常L02細(xì)胞的TG、ALT、AST、LDH、ALP水平、FTOmRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。
　　2.與正常對(duì)照組比較，高脂組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，F(xiàn)TOmRNA和蛋白表達(dá)均增高，差異均有顯著性(P＜0.01)。
　　3.與高脂組比較，高脂+

8、艾塞那肽組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯減少，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平下降，F(xiàn)TOmRNA和蛋白表達(dá)均下降，差異均有顯著性(P＜0.01)。
　　4.與高脂+艾塞那肽組比較，高脂+艾塞那肽+PI3K抑制劑組細(xì)胞內(nèi)脂滴增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，F(xiàn)TOmRNA和蛋白表達(dá)均增高，差異均有顯著性(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.GLP-1受體激動(dòng)劑艾塞那肽可減輕肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，改善肝細(xì)胞功能。