樹突狀細胞分泌的exosomes聯(lián)合環(huán)磷酰胺和Poly I：C的抗腫瘤作用研究.pdf

1、本實驗的目的是證明exosomes聯(lián)合Poly I：C和環(huán)磷酰胺的抗腫瘤效果。本實驗通過細胞因子誘導骨髓來源的造血干細胞分化為髓系樹突狀細胞，腫瘤細胞L1210的凍融抗原負載樹突狀細胞，超速離心結合膜過濾的方法提取樹突狀細胞分泌外泌體。為了觀察Poly I：C促DC成熟的作用，體外在imDC培養(yǎng)體系中加入Poly I：C，流式檢測DC表面分子的變化，發(fā)現(xiàn)Poly I：C刺激后DC表面I-A／I-E,CD80,CD86,CD11c的表達上

2、調。用得到的外泌體在DC存在的情況下刺激脾細胞，應用cck-8試劑盒測量脾細胞的增殖，實驗結果為加入exosomes組平均吸光度為(0.90±0.22)，未加exosomes組平均吸光度為(0.53±0.1 3)，差異具有統(tǒng)計學意義。Exosomes刺激脾細胞制備抗原特異性的細胞毒性T淋巴細胞(CTL)，通過DIOC—18聯(lián)PI的方法測定脾細胞對腫瘤細胞的殺傷作用，實驗得到負載腫瘤抗原的exosomes刺激的脾細胞在體外能夠殺傷腫瘤細胞

3、L1210，在效靶比分別為5：1和10：1時實驗組的殺傷率分別為(21.19±3.99)％、(30.5±3.85)％，對照組的殺傷率分別為(17.544±4.48)％、(19.38±4.68)％，10：1時實驗組與對照組相比殺傷率有顯著性差異。L1210細胞接種小鼠，制備荷瘤小鼠模型，exosomes聯(lián)合CTX和PolyI:C對荷瘤小鼠進行治療，觀察腫瘤的生長速度，小鼠的生存期。通過實驗得到exosomes能延長荷瘤小鼠的生存期；應用C