停止高糖,轉(zhuǎn)錄共激活子p300持續(xù)活化及機(jī)制.pdf

1、目的:以人系膜細(xì)胞(HMCs)作為體外模擬代謝記憶的研究對(duì)象，觀察轉(zhuǎn)錄共激活子p300及組蛋白乙?；疕3(Ac-H3)、Ac-H4蛋白表達(dá)規(guī)律，并探討p300在其中的潛在匯集點(diǎn)作用。
　　 方法:將培養(yǎng)的HMCs按以下分組處理:①高糖誘導(dǎo)代謝記憶模型，分為正糖組（NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d）、滲透壓組(LG，NG+19.5mmol/L L-葡萄糖×2d)、高糖組(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d)、記憶組

2、(M1、M2、M3組，25mmol/L D-葡萄糖×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3、6、9d)、持續(xù)正糖組（NC，5.5mmol/L D-葡萄糖×9d）;②采用H2O2模擬氧化應(yīng)激記憶模型，分為正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×30min);正糖+H2O2組(H2O2，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μmol/LH2O2×30min); H2O2記憶組(H2O2-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+100μm

3、ol/LH2O2×30min+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d);正糖對(duì)照組（NG3，5.5mmol/LD-葡萄糖×3d）。③蛋白激酶C(PKC)β2激活記憶模型，分為正糖組（NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d）;高糖組(HG，25mmol/L D-葡萄糖×2d);記憶組（M，25mmol/L D-葡萄糖×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;空載體記憶組（HN，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-null×2d+

4、5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;PKCβ2激活記憶組（PO，25mmol/L D-葡萄糖+Ad5-PKCβ2×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d）;PKCβ2抑制劑記憶組(PI，25mmol/L D-葡萄糖×2d+10μmol/L CGP53353+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d)。④糖化終產(chǎn)物記憶模型，分為正糖組(NG，5.5mmol/L D-葡萄糖×2d);正糖+AGEs組(AGEs，5.5mmol/L D-葡

5、萄糖+250μg/ml AGEs×2d);AGEs記憶組(AGEs-M，5.5mmol/L D-葡萄糖+250μg/mlAGEs×2d+5.5mmol/L D-葡萄糖×3d); BSA組（NG+BSA，給予同濃度BSA對(duì)照）。二氫二氯熒光素(DCFDA)及酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的表達(dá)。Western blotting檢測(cè)各組細(xì)胞p300、Ac-H3和Ac-H4及PKCβ2蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:①HG組p300、A

6、c-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)增加，分別較NG組增加了1.15倍、0.93倍和0.87倍(P＜0.05)，同時(shí)伴有PKCβ2蛋白及胞內(nèi)ROS水平上調(diào);M1、M2、M3組p300、Ac-H3、Ac-H4、PKCβ2蛋白水平及ROS表達(dá)水平較NG組仍顯著為高，即使M3組亦較NG組分別增加75％、49％、47％、98％和48％(P＜0.05)。②H2O2組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)均升高，較對(duì)照組分別升高了1.03倍、0.85倍和

7、0.79倍(P＜0.05)，而H2O2-M組各蛋白表達(dá)較對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③與M組比較，PO組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，分別為M組的1.25倍、1.06倍和1.10倍(P＜0.05)，選擇性PKCβ2抑制劑CGP53353可以顯著降低上述蛋白表達(dá)。④AGEs組p300、Ac-H3和Ac-H4蛋白表達(dá)上調(diào)，較對(duì)照組分別升高了1.73倍、1.08倍和1.05倍(P＜0.05)，AGE-M組各蛋白較對(duì)照組分別增