腫瘤壞死因子α對成骨細胞生長及其骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體的調控研究.pdf

1、腫瘤壞死因子α(TNF-α)是調節(jié)骨代謝的重要因子，其濃度的改變與老年性骨質疏松及牙槽骨質丟失等多種骨性疾病息息相關。TNF-α對于成骨細胞生長有調控作用，但其調控機制尚不明了；有資料提示TNF-α可能對于骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)的成骨作用有調控作用，但其調控機制未明。本文通過對于觀察TNF-α對于大鼠成骨細胞增殖和分化的影響來研究TNF-α對于成骨細胞生長的調控作用，并觀察TNF-α對于成骨細胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(BMPRs)基因表

2、達的調控作用，來探索TNF-α對于成骨細胞生長調控作用的分子生物學機制。 目的： 觀察TNF-α對于成骨細胞生長的影響，研究TNF-α對成骨細胞BMPRs的調控作用，來探討TNF-α對于成骨細胞的分子生物學調控機制。 方法： 1. 大鼠成骨細胞的培養(yǎng)和鑒定：取出生一周內的Wistar大乳鼠頭顱骨標本，采用酶消化法提取原代成骨細胞，DMEM完全培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。進行三重鑒定：包括形態(tài)、堿性磷酸酶(ALP)活性

3、和礦化結節(jié)檢測。 2.觀測TNF-α對于成骨細胞生長的影響。采用不同濃度TNF-α誘導成骨細胞，利用MTT法檢測成骨細胞增殖的變化；利用PNPP偶氮法檢測成骨細胞分化情況。 3.觀測TNF-α對于成骨細胞各型BMPR基因表達的影響。采用不同濃度的TNF-α誘導成骨細胞，利用RT-PCR法檢測成骨細胞各型BMPRmRNA量的變化，并以大鼠GAPDH基因為內參進行標準化比較。 結果： 1.大鼠成骨細胞培養(yǎng)和鑒

4、定：成功培養(yǎng)出大鼠成骨細胞，并經過鑒定表明其純度較高。 2.觀測TNF-α對于成骨細胞生長的影響：MTT法測定成骨細胞增殖活性，結果表明不同濃度TNF-α對于成骨細胞增殖均有抑制作用，其中TNF-α濃度大于50ng/ml時，其吸光度(OD值)有明顯減少，與對照組的差異有明顯統(tǒng)計學意義。PNPP偶氮法測定成骨細胞分化程度，結果表明，各濃度TNF-α對于成骨細胞ALP活性均有抑制作用，其中當TNF-α濃度大于5ng/ml時，其OD值

5、有明顯的統(tǒng)計學意義。 3.觀測TNF-α對于成骨細胞各型BMPR基因的表達：通過結果表明各濃度TNF-α誘導成骨細胞后BMPR-IA和BMPR-Ⅱ的mRNA量均減少，BMPR-IB的mRNA的量有所增加。 結論： 通過結果，本研究發(fā)現，TNF-α對于成骨細胞的增殖和分化均有抑制作用，并且對于成骨細胞BMPR-IA和BMPR-Ⅱ的表達有其抑制作用。根據此結果可以得出TNF-α對于成骨細胞的調控作用機制有部分是通過影