131I核素標(biāo)記B7-H3單抗靶向治療腎透明細(xì)胞癌實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腎癌(renal cell carcinoma，RCC)是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤，其最常見(jiàn)的病理類(lèi)型為腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)，其所占腎癌比例超過(guò)80％。腎根治性切除手術(shù)是早期腎癌的主要治療方式，而腎癌術(shù)后及轉(zhuǎn)移性腎癌缺乏有效的治療手段。針對(duì)腫瘤新生血管的靶向治療被認(rèn)為是最有可能成為晚期腎癌的有效治療手段，并且針對(duì)腫瘤血管開(kāi)展靶向治療已成為腫瘤生物治療的熱點(diǎn)，其藥物從作用機(jī)制上

2、主要分為兩類(lèi):抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)/血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)和抑制哺乳動(dòng)物類(lèi)雷帕霉素靶蛋白(mTOR)途徑。目前靶向治療的臨床治療效果并不顯著，加上其獨(dú)特的不良反應(yīng)，限制了其在臨床的進(jìn)一步應(yīng)用。B7-H3在腫瘤的進(jìn)展尤其是在腫瘤新生血管生成方面是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，B7-H3可作為腫瘤相關(guān)性抗原發(fā)揮重要作用，是腫瘤靶向治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。
　　本研究首先從臨床收集腎透明細(xì)胞癌病例，檢測(cè)B7-H3在腎癌中的表達(dá)，結(jié)

3、合臨床資料，觀察B7-H3在腎癌的價(jià)值及臨床意義。然后我們采用核素131I進(jìn)行B7-H3鼠抗人單克隆抗體4H7標(biāo)記，131I-4H7的標(biāo)記率，放化純達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，且在腎癌荷瘤鼠移植瘤內(nèi)具有較高的攝取率和較長(zhǎng)的滯留時(shí)間，具有良好的靶向性，進(jìn)而利用131I-4H7對(duì)荷腎癌移植瘤裸鼠進(jìn)行治療，觀察131I-4H7對(duì)腎癌的治療效果，并初步探討其可能存在的機(jī)制及應(yīng)用價(jià)值。
　　本研究分三個(gè)部分:
　　第一部分：B7-H3在腎透明細(xì)胞癌

4、中的表達(dá)及臨床意義
　　目的:探討B(tài)7-H3在腎透明細(xì)胞癌患者血清水平及其臨床意義，及B7-H3在腎透明細(xì)胞癌組織中表達(dá)的臨床意義。
　　方法:收集臨床上確診為腎透明細(xì)胞癌病例資料126例，對(duì)其臨床資料進(jìn)行分析，并留取患者術(shù)前血清，及術(shù)后腎腫瘤組織標(biāo)本。運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)腎透明細(xì)胞癌患者及健康體檢者對(duì)照組血清可溶性B7-H3，結(jié)合患者臨床資

5、料評(píng)估其對(duì)腎透明細(xì)胞癌患者的臨床意義。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法（immunohistochemistry，IHC）檢測(cè)腎透明細(xì)胞癌組織中B7-H3的表達(dá)，尤其是在血管上皮的表達(dá)，結(jié)合患者臨床資料，觀察B7-H3表達(dá)陽(yáng)性的臨床意義。
　　結(jié)果:腎透明細(xì)胞癌患者血清中存在可溶性B7-H3，與健康體檢者相比，其水平顯著增高。腎透明細(xì)胞癌患者游離B7-H3高水平與腎癌臨床分期、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處臟器有無(wú)轉(zhuǎn)移有關(guān)。B7-H3在腎透明細(xì)胞癌組織

6、中陽(yáng)性表達(dá)高于在正常腎臟組織中的表達(dá)。126例腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本中，有102例(80.95％)腎透明細(xì)胞癌患者腫瘤組織血管中可見(jiàn)B7-H3陽(yáng)性表達(dá)。
　　結(jié)論:腎透明細(xì)胞患者血清可溶性B7-H3水平顯著上調(diào)，與疾病進(jìn)展相關(guān)。腎透明細(xì)胞癌組織中高表達(dá)B7-H3，尤其是在腫瘤血管中呈陽(yáng)性表達(dá)，提示B7-H3可能在腫瘤血管生成方面發(fā)揮重要作用。
　　第二部分：B7-H3單克隆抗體4H7的131I標(biāo)記及體內(nèi)生物分布研究
　　目的

7、:研究鼠抗人B7-H3單克隆抗體4H7的131I標(biāo)記方法，觀察標(biāo)記抗體藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及其在腎透明細(xì)胞癌皮下移植瘤模型中生物學(xué)分布與顯像研究。
　　方法:采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，測(cè)定131I-4H7標(biāo)記率、放化純和穩(wěn)定性。對(duì)131I-4H7體內(nèi)分布及藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。觀察131I-4H7在荷腎透明細(xì)胞癌（786-0細(xì)胞）裸鼠皮下移植瘤模型中的生物學(xué)分布，并進(jìn)行顯像研究。
　　結(jié)果:131I-4H7標(biāo)記率為61.64％，放化

8、純?yōu)?8.4％。131I-4H7在ICR小鼠體內(nèi)代謝過(guò)程符合一級(jí)血藥動(dòng)力學(xué)二室模型，t1/2α為27.94min，t1/2β為1634.74min，在體內(nèi)主要通過(guò)肝和腎代謝。131I-4H7在荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)研究中顯示131I-4H7在腫瘤組織中停留時(shí)間較長(zhǎng)，且皮下移植瘤攝取率較高，在24h達(dá)最高，為3.32％ID/g。荷瘤鼠體內(nèi)γ顯像研究顯示，131I-4H7組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)放射濃聚高于Na131I組。
　　結(jié)論:131I-4H7易于

9、制備，放化純度高，標(biāo)記物的穩(wěn)定性好，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。131I-4H7在腎癌荷瘤鼠中具有較高的攝取率和較長(zhǎng)的滯留時(shí)間，具有良好的靶向性，對(duì)腎癌放免顯像和治療有潛在的應(yīng)用前景。
　　第三部分：131I標(biāo)記B7-H3單克隆抗體在腎透明細(xì)胞癌裸鼠移植瘤治療實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察131I-4H7在腎透明細(xì)胞癌裸鼠移植瘤中的治療作用，并探討其可能存在的機(jī)制及應(yīng)用價(jià)值。
　　方法:在荷腎透明細(xì)胞癌786-0細(xì)胞裸鼠移植瘤直徑達(dá)8mm

10、時(shí)，將裸鼠模型分為131I-4H7組、131I-mIgG組、131I組及生理鹽水組，各組分別注射250μCi/100μl的131I-4H7、131I-mIgG、Na131I或等體積生理鹽水，通過(guò)腫瘤的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行傳統(tǒng)藥效學(xué)分析，及在第0、7、14、21天分別注射18氟-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽(18F-RGD)，行小動(dòng)物正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(positron emissiontomography-computed tom

11、ography，PET-CT)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤體積變化及觀察移植瘤內(nèi)組織放射性攝取率變化。
　　結(jié)果:131I-4H7組腫瘤生長(zhǎng)明顯緩慢，治療21天后，腫瘤體積明顯小于131I及生理鹽水注射組，抑瘤率達(dá)48.81％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。131I-mIgG組在21天時(shí)的抑瘤率為22.41％，131I-4H7抑瘤效果優(yōu)于131I-mIgG組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。小動(dòng)物PET-CT檢查提示，在第7天、14天