全自動(dòng)髓過(guò)氧化物酶定量檢測(cè)方法的建立及其臨床應(yīng)用研究.pdf

1、急性冠脈綜合征是由冠狀動(dòng)脈斑塊破裂、血栓形成導(dǎo)致急性或亞急性心肌缺血的臨床綜合癥。炎癥反應(yīng)伴隨斑塊形成是該綜合癥發(fā)生發(fā)展的主要病理機(jī)制。髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase MPO)是一種以血紅素為輔基的蛋白酶,在炎癥發(fā)生時(shí)由中性粒細(xì)胞釋放入血,因此定量測(cè)定血液中髓過(guò)氧化物酶含量可一定程度上反映機(jī)體炎癥反應(yīng)的狀態(tài)與嚴(yán)重程度,用于輔助診斷急性冠脈綜合癥的發(fā)生與發(fā)展。
　　膠乳增強(qiáng)免疫比濁法,是從免疫凝集實(shí)驗(yàn)發(fā)展而來(lái)一種高靈敏

2、度、可用于全自動(dòng)生化分析儀的簡(jiǎn)便快速免疫分析方法,從而使待檢測(cè)物質(zhì)的分子量和含量上突破了原有免疫透射比濁法的局限性。以其高特異性、高靈敏度、線性范圍寬泛和高度自動(dòng)化被大量應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)中。
　　本研究通過(guò)篩選不同單克隆抗體,經(jīng)優(yōu)化配對(duì)成為檢測(cè)抗體對(duì),再根據(jù)髓過(guò)氧化物酶的含量,選擇不同粒徑的膠乳顆粒,在兼顧線性和靈敏度的條件下,最終確定最優(yōu)膠乳微粒大小203nm。在此基礎(chǔ)上優(yōu)化抗體和膠乳濃度,緩沖液體系,整合配制工藝。確保檢測(cè)方法的

3、最優(yōu)化和試劑盒配置工藝的穩(wěn)定性、一致性與可傳承性。
　　按照EP5-A2,EP6-A,EP9-A2等文件,對(duì)該方法進(jìn)行了全面的性能評(píng)價(jià),該方法的靈敏度:LoB=1.0ng/ml,LoD=3.9ng/ml,LoQ=4.7ng/ml,批內(nèi)變異系數(shù)(CV):1.25％,批間變異系數(shù)(CV):1.85%,平均回收率:100.0%±1.2%,血漿的參考范圍:54-266ng/ml,檢測(cè)線性范圍可達(dá)20---1300ng/ml,未見(jiàn)明顯內(nèi)源性

4、干擾物?？蓪?shí)現(xiàn)全自動(dòng)生化分析儀上使用,操作簡(jiǎn)便。
　　利用我們研制的MPO檢測(cè)試劑盒,進(jìn)行臨床試驗(yàn)。結(jié)果MPO水平隨急性冠脈綜合征發(fā)展升高。與常規(guī)的心腦血管檢測(cè)指標(biāo)有一定相關(guān)性(P<0.05),且與ACS疾病的進(jìn)程相關(guān)。通過(guò)對(duì)不穩(wěn)定心絞痛和急性心肌梗死病人檢測(cè)制定cut-off值,繪制ROC曲線,不穩(wěn)定心絞痛組,MPO在ROC曲線下的面積,A=0.795,p=0.000,提示MPO診斷UAP準(zhǔn)確度為中等;急性心肌梗死組MPO的RO

5、C曲線下面積A=0.911,p=0.000,提示MPO診斷AMI準(zhǔn)確度較高。自身免疫性疾病與正常對(duì)照組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),炎癥疾病組MPO水平明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)。本法與臨床確診結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn),p=0.000,說(shuō)明MPO的檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷具有一致性。采用Logistic多元回歸,Wald逐步后退法篩選出MPO,LDH,HCY,IMA和年齡建立預(yù)測(cè)模型,決定系數(shù)(R2=0.922),總正確率為96.8

6、0%,提示使用回歸方程對(duì)AMI的預(yù)測(cè)價(jià)值較高。
　　根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局有關(guān)規(guī)定,完成產(chǎn)品注冊(cè)所需所有相關(guān)技術(shù)資料,并取得產(chǎn)品注冊(cè)證。同時(shí)完成產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)品的溯源,確保結(jié)果的可溯源性和各不同檢測(cè)地之間結(jié)果互認(rèn)。
　　通過(guò)以上的研究和實(shí)驗(yàn)證明,膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)血漿中髓過(guò)氧化物酶的檢測(cè)方法安全可靠。檢測(cè)試劑盒性能優(yōu)越,可以滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的需求。臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示MPO可以預(yù)測(cè)急性冠狀動(dòng)脈綜合征的發(fā)生,同時(shí)可以作為ACS的