血清髓過氧化物酶檢測方法的建立及其在冠心病危險分層及預測急性冠脈事件的應用研究.pdf

1、背景：
　　臨床和流行病學研究顯示低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平增高等代謝紊亂與冠心病(CHD)急性冠脈事件緊密相關。由于對于動脈粥樣硬化為一慢性炎性病變的認識已獲公認，因此有關動脈粥樣硬化和CHD相關炎性外顯因素的研究成為熱點。新近研究發(fā)現(xiàn)，血清髓過氧化物酶(MPO)對冠狀動脈血管壁粥樣硬化病變有廣泛的影響，其表達和濃度升高促進CHD發(fā)生和發(fā)展，是一種新的預測急性冠脈綜合征(ACS)的炎性標志物。目前，國內外檢測血清MPO

2、水平多采用ELISA法和選擇抑制法，但均因其影響因素多、精密度差、操作繁瑣而使其在臨床上的普遍應用受到限制。
　　目的：
　　本研究擬建立一種基于抗原-抗體特異性反應原理的快速定量檢測血清MPO水平的新方法--顆粒增強透射免疫分析法；探索血清MPO與白細胞介素-6(IL-6)、超敏C反應蛋白(hs-CRP)聯(lián)合檢測對CHD危險分層的價值；探討CHD患者MPO與ACS，LDL-C等代謝紊亂相關參數(shù)，炎性標志物，CHD傳統(tǒng)危險因

3、素及生活習性的可能聯(lián)系；前瞻性追蹤研究穩(wěn)定性心絞痛(SAP)患者血清MPO基線水平與ACS事件的相關性。
　　方法：
　?、儆肕PO抗體包被乳膠顆粒建立MPO顆粒增強透射免疫分析法，按美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(CLSI)文件，對該法進行方法學性能評價。
　?、跈z測CHD組[急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)、SAP患者]和對照組[非冠心病疾病組(NCHD)和健康體檢者]血清MPO、IL-6和hs-CRP

4、水平。用矩陣決策法評估其對ACS的診斷效率。
　　③用Logistic回歸分析血清MPO水平與ACS，代謝紊亂相關參數(shù)[LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、三?；视?TG)、同型關胱氨酸(Hcy)、空腹血糖(FBG)、胰島素(INS)]，炎性標志物(IL-6、hs-CRP)、其他CHD傳統(tǒng)危險因素及生活習性[體質指數(shù)(BMI)、糖尿病、高血壓、性別、年齡、吸煙、飲酒]的相互聯(lián)系。
　　④前瞻性追

5、蹤觀察146例SAP患者急性冠脈事件發(fā)生情況，比較MPO基線水平增高組與正常-低組ACS發(fā)生率差異。
　　結果：
　?、僮匝薪⒌臏y定血清MPO顆粒增強透射免疫分析法。該法準確度好，相對偏差≤9.95％；精密度高，批內CV≤1.92％，批間CV≤3.00％；線性范圍寬，為0 ng/mL～1300 ng/mL；靈敏度高，最低檢測限為5 ng/mL：抗干擾能力強，膽紅素≤513μmol/L、抗壞血酸≤0.40g/L、三?；视汀?/p>

6、11.3 mmol/L對其結果無影響。與ELISA法及選擇抑制法比對，相關性良好，R2分別為0.9865和0.9867。
　?、贏CS組MPO明顯比SAP組、NCHD組及健康組高(P<0.001)。串聯(lián)分析3種炎性標志物(MPO、IL-6和hs-CRP)診斷ACS的靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值和準確度分別為74.53％、79.82％、89.64％、57.23％和76.12％。
　?、垩錗PO濃度與LDL-C、TC

7、、TG、Hcy、FBG、IL-6、hs-CRP、收縮壓、舒張壓、年齡及體質指數(shù)呈正相關，與HDL-C呈負相關。MPO受試者工作特征曲線(ROC)下的面積(Az)為0.84(95％CI：0.80-0.88，P<0.001)，MPO最佳cut-off值取164.77 ng/mL時，其診斷ACS的靈敏度和特異性分別為79.1％和82.1％。逐步多元Logistic回歸分析顯示，在剔除TG、Hcy、UA、FBG、INS、IL-6、SBP、DBP

8、、性別、酗酒等混雜因素后，LDL-C、HDL-C、TC、hs-CRP、age、BMI、ACS、吸煙是與高MPO水平相關的獨立變量。
　　LDL-C最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高MPO的比值比(OR)為3.24(95％CI：1.67-6.29，P=0.001)；HDL-C最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高MPO的OR為0.19(95％CI：0.11-0.34，P<0.001)；TC最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M

9、PO的OR為2.94(95％CI：1.55-5.58，P=0.001)；hs-CRP最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高MPO的OR為2.30(95％CI：1.32-3.99，P=0.003)；年齡最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高MPO的OR為2.37(95％CI：1.36-4.13，P=0.002)；體質指數(shù)最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高MPO的OR為2.03(95％CI：1.17-3.54，P=0.012)；ACS組

10、高MPO發(fā)生率是非ACS組的2.74倍(95％CI：1.71-4.39，P<0.001)；吸煙組高MPO發(fā)生率為非吸煙組的2.62倍(95％CI：1.62-4.25，P<0.001)。其中LDL-C(ⅢvsⅠ tertile)和ACS(yes vsno)分別在定量變量和定性變量中的比值比最高。MPO從最低三分位數(shù)到最高三分位數(shù)，其ACS和高LDL-C患病率均逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)，分別從最低(第一)三分位數(shù)的46.

11、4％和8.9％，增加到中間(第二)三分位數(shù)的68.O％和31.5％，到最高(第三)三分位數(shù)的88.8％和59.8％。
　?、軐?46例年齡38～84歲的SAP患者隨訪6個月研究發(fā)現(xiàn)，MPO基線水平增高組ACS發(fā)生率為28.9％(11/43)，明顯比MPO基線水平正常-低組ACS發(fā)生率8.3％(9/103)高(X2=10.10，P=0.001)。
　　結論：
　?、僮匝薪⒌臏y定血清MPO顆粒增強透射免疫分析法。該法靈敏

12、度和特異性高，準確性好，線性范圍寬，抗干擾力強，操作簡易，與ELISA法及選擇抑制法相關良好，適合在自動生化分析儀上使用。
　　②聯(lián)合檢測MPO、IL-6和hs-CRP可鑒別診斷CHD不同病理階段，提高對ACS診斷的特異性和陽性預測值，有助于CHD的危險分層。
　?、郾狙芯刻峁┝艘韵屡R床流行病學證據(jù)：增加的血清MPO水平與ACS和高LDL-C水平緊密相聯(lián)；MPO與LDL-C交互影響促進CHD患者動脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展，