Akt信號(hào)途徑介導(dǎo)VEGF-C--D促進(jìn)胃癌淋巴管新生.pdf

1、背景與目的：
　　 隨著人類對(duì)抗癌癥的科學(xué)研究的深入，淋巴管新生在決定腫瘤預(yù)后方面的重要作用已漸為人熟知。胃癌在極早期即可發(fā)生淋巴管轉(zhuǎn)移，是嚴(yán)重影響胃癌治療效果及術(shù)后生存率乃至術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)健。面對(duì)淋巴管轉(zhuǎn)移在腫瘤發(fā)展及預(yù)后中如此重要作用，研究人員為了闡明淋巴管轉(zhuǎn)移具體機(jī)制而不懈努力。近年，人們發(fā)現(xiàn)Akt在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中起著重要的作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其與腫瘤淋巴管轉(zhuǎn)移或腫瘤淋巴管新生中有著密切的聯(lián)系。不少報(bào)道已證實(shí)Akt信號(hào)通

2、路參與腫瘤淋巴管轉(zhuǎn)移或淋巴新生。但目前有關(guān)活化Akt在促進(jìn)胃癌淋巴管新生或淋巴管轉(zhuǎn)移作用及具體機(jī)制尚未見報(bào)道。鑒于VEGF信號(hào)途徑在淋巴管新生方面中也起著不可代替的作用。我們研究擬通過分析原位胃癌p-Akt、p-mTOR兩個(gè)Akt信號(hào)通路上核心蛋白、淋巴管新生因子VEGF-C、VEGF-D與微淋經(jīng)巴管密度三者之間的關(guān)系，并通過抑制Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)淋巴管新生因子的影響，來(lái)探討Akt/mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)VEGF-C/-D來(lái)促進(jìn)腫瘤淋巴

3、管新生的作用，進(jìn)而明確Akt/mTOR/VEGF-C/-D信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在胃癌中的存在。
　　 方法：
　　 1、原位胃癌組織實(shí)驗(yàn)：收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2011年4月到11月份胃癌患者手術(shù)新鮮標(biāo)本55例，患者手術(shù)前未接受任何放、化療及免疫治療。其中，男42例，女13例；通過免疫組化分別檢測(cè)原位胃癌中p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D、D2-40蛋白表達(dá)水平，觀察各指標(biāo)在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率，并分析它們之

4、間的相關(guān)性關(guān)系。
　　 2、胃癌SGC7901細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)：分LY294002與Rapamycin兩大藥物干預(yù)組。
　　 (1)MTT法：利用Akt活化抑制劑LY294002和mTOR活化抑制劑Rapamycin分別分0μM、12.5μM、25μM、50μM和0hM、25nM、50nM、100nM四個(gè)不同濃度作用于SGC7901細(xì)胞，并在24h，48h及72h三個(gè)不同時(shí)間觀察SGC7901胃癌細(xì)胞存活率的變化。(2)根據(jù)

5、MTT結(jié)果選取合適藥物濃度，利用上述兩藥物分別抑制PI3K/Akt信號(hào)通路的不同靶點(diǎn)，在藥物作用24h、48h、72h提示細(xì)胞蛋白。通過WesternBlot檢測(cè)分析兩藥物對(duì)Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、原位胃癌中p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D表達(dá)之間關(guān)系
　　 胃癌p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VE

6、GF-D的陽(yáng)性表達(dá)率分別是74.5％，85.45％，72.73％和58.18％。結(jié)果還顯示p-Akt和p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.01)。p-mTOR與VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)水平亦存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)p-mTOR、VEGF-C與VEGF-D表達(dá)水平在p-Akt的陰性組、陽(yáng)性組、強(qiáng)陽(yáng)性組中存在組間差異(P<0.05或<0.01)。VEGF-C與VEGF-D表達(dá)水平

7、在p-mTOR的陰性組、陽(yáng)性組、強(qiáng)陽(yáng)性組中也存在組間差異(P<0.05或<0.01)。
　　 2、p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D表達(dá)與胃癌淋巴管密度的關(guān)系
　　 原位胃癌組織平均LVD為94.18±72.965，范圍0-263，而癌旁正常組織中平均LVD為23.31±21.569，范圍為0-95，兩部位LVD計(jì)數(shù)存在顯著性差異(P<0.001)。胃癌組織中p-Akt、p-mTOR、VEGF-C和VE

8、GF-D蛋白表達(dá)水平與LVD之間呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05或<0.01)。LVD在P-Akt或P-mTOR陰性組、陽(yáng)性組、強(qiáng)陽(yáng)性組中呈逐級(jí)遞增的表現(xiàn)，三組間存在差異性(P<0.05或P<0.01)。
　　 3、Akt活化抑制劑LY294002和mTOR活化抑制劑Rapamycin對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響
　　 不同濃度的LY294002和Rapamycin對(duì)胃部SGC7901細(xì)胞均有不同程度的抑制作用，其抑制

9、率隨著藥物濃度和藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，各組間存在著顯著性差異，P均<0.001。
　　 4、LY294002和Rapamycin對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞Akt信號(hào)通路及淋巴管新生子的影響
　　 在LY294002干預(yù)組中，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D各蛋白的表達(dá)水平逐漸下降，而且下降的程度與未干預(yù)組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或<0.01)；在組間比較中也存在顯著性差

10、異(P<0.05)。Akt、mTOR表達(dá)水平在干預(yù)前后無(wú)明顯變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異(P>0.05)。p-Akt與p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)呈一致性變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈正相關(guān)(P均<0.05)。p-mTOR的表達(dá)與VEGF-C、VEGF-D表達(dá)變化同樣也存在正相關(guān)性關(guān)系(P均<0.05)。在Rapamycin組中，結(jié)果表示隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D各蛋白的表達(dá)逐漸下降，而且下降的程度與未干

11、預(yù)組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組間比較存在顯著性差異(P<0.05)。另外，Akt、p-Akt、mTOR的表達(dá)干預(yù)前后無(wú)明顯變化，統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異(P>0.05)；此外，p-mTOR與VEGF-C、VEGF-D表達(dá)變化呈正相關(guān)關(guān)系(P均<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 p-Akt、p-mTOR、VEGF-C、VEGF-D蛋白表達(dá)水平均與胃癌淋巴管密度密切相關(guān)。通過阻斷Akt和mTOR的活化可使淋巴管新生因子VE