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1、本研究以凝血酶能催化纖維蛋白原形成纖維蛋白,進(jìn)而形成血栓的反應(yīng)為基礎(chǔ),篩選了藥用真菌和放線菌代謝產(chǎn)物的體外抗凝活性,篩得一株具有較高抗凝活性的菌株CA03-1.進(jìn)一步分別從熱和酸堿穩(wěn)定性、分子量大小、離子交換特性等方面對(duì)活性蛋白的分離純化進(jìn)行了研究.通過(guò)膜過(guò)濾、HZ-816脫色、硫酸銨沉淀、透析去鹽、DEAE-Sephacel離子交換、Sephadex G-100分子篩層析、冷凍干燥等步驟,得到了高度純化的抗凝活性蛋白樣品TAP.活性回
2、收率為10.3%,比活力高到1.82×104IU/mg.活性蛋白TAP經(jīng)PAGE凝膠電泳,銀染顯色為單一條帶.反相HPLC法分析表明TAP純度大于95%.SDS-PAGE電泳結(jié)果表明TPA由兩種不同亞基組成,其分子量分別為29.2kD和21.9kD.等電點(diǎn)測(cè)定表明pI約為4.45左右.抗凝活性蛋白為絲氨酸蛋白酶,對(duì)熱敏感.在一定濃度范圍內(nèi),MgSO<,4>、CaCl<,2>、MnCl<,2>、KCl對(duì)TAP的抗凝活性起促進(jìn)作用.胃蛋白酶
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