子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中孕激素膜受體表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的牛血清白蛋白—孕酮復(fù)合物(P—BSA—FITC)染色，運(yùn)用直接熒光標(biāo)記及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞膜孕激素受體表達(dá)情況，通過(guò)免疫印記雜交技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞內(nèi)p—ERK表達(dá)的變化，以期證實(shí)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中孕激素膜受體的存在，進(jìn)一步完善孕激素的非基因作用機(jī)制。探討熒光標(biāo)記孕酮在孕激素非基因作用機(jī)制研究中的應(yīng)用價(jià)值。 方法：①用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的牛血清白蛋白—孕酮復(fù)

2、合物作用于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞中熒光標(biāo)記部位。②流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的牛血清白蛋白—孕酮復(fù)合物作用下，在不同時(shí)點(diǎn)時(shí)細(xì)胞熒光標(biāo)記情況。③免疫印跡雜交技術(shù)檢測(cè)不同濃度異硫氰酸熒光素標(biāo)記的牛血清白蛋白—孕酮復(fù)合物作用不同時(shí)間時(shí)，子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中p—ERK表達(dá)的變化。 結(jié)果：⑴P—BSA—FITC作用于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞后，在細(xì)胞膜上可見(jiàn)熒光染色，而核內(nèi)未

3、見(jiàn)熒光染色。用BSA—FITC代替p—BSA—FITC，未見(jiàn)熒光染色細(xì)胞。⑵流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度的P—BSA—FITC作用下，在各時(shí)點(diǎn)的熒光標(biāo)記細(xì)胞數(shù)均高于空白對(duì)照組，其中以25ug/ml組熒光標(biāo)記率最高。⑶P—BSA—FITC作用下，細(xì)胞內(nèi)p—ERK水平受到抑制，在作用5分鐘時(shí)抑制作用最強(qiáng)。 結(jié)論：①在子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞膜表面存在著孕激素膜受體，其與孕激素的結(jié)合能力大小與孕激素的濃度和作用時(shí)間有關(guān)。②孕