腦源性神經生長因子前體ProBDNF在大鼠后足切割痛的作用及可能機制研究.pdf

1、第一章背根神經節(jié)proBDNF在大鼠后足切割后的表達及作用
　　 目的:觀察大鼠后足切割后proBDNF表達變化及對切割疼痛的影響。
　　 方法:采用縱行切割SD大鼠后足作為疼痛模型，運用免疫熒光雙標記方法，觀察大鼠后足切割后不同時間點（1-72 hr）proBDNF在相應節(jié)段背根神經節(jié)的表達變化。腹腔注射proBDNF抗體中和內源性proBDNF后，以Von Frey尼龍纖維刺激后足行機械痛敏評價。
　　 結果

2、:大鼠后足切割后1-24 hr內，proBDNF在切割同側背根神經節(jié)表達上調，proBNDF免疫陽性細胞百分比在切割后1-24 hr內也明顯增加。腹腔內給予proBDNF抗體明顯增加大鼠后足切割后的縮足閾值。
　　 結論:大鼠后足切割后背根神經節(jié)proBDNF表達上調，proBDNF參與了大鼠后足切割后機械痛敏的過程。
　　 第二章 proBDNF腺病毒載體的構建及鑒定
　　 目的:構建腺病毒介導的proBDNF

3、基因用于活體組織的研究。
　　 方法:從提供的模板中利用PCR方法釣取目的基因，而后將目的載體進行酶切，產物電泳回收后進行交換，再把交換產物轉化至細菌感受態(tài)細胞。然后對長出的克隆先進行菌落PCR鑒定，再進行測序和比對分析。測序正確后，采用Lipofectamine2000轉染293T細胞24小時后，用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達變化。從菌落中收集生長狀態(tài)良好的目的細胞，提取蛋白，采用Western Blot的方法檢測目的基因

4、的表達情況。采用AdMax腺病毒包裝系統(tǒng)包括腺病毒穿梭質粒和輔助包裝質粒(pBHG lox△E1，3 Cre)共同轉染HEK293細胞，再對pDC315-proBDNF病毒擴增、提純和Western Blot檢測。
　　 結果:所構建的pDC315-proBDNF重組腺病毒經酶切、PCR和Western Blot鑒定成功的轉化了proBDNF，基因片段大小為741bp。原代病毒滴度為8.0×109 PFU/mL，proBDNF在