二氯化鈷誘導大鼠肝癌細胞系CBRH7919缺氧與凋亡和增殖的研究.pdf

1、目的：乏氧現(xiàn)象普遍存在于動物和人的實體腫瘤中。低氧誘導因子(HIF)在乏氧狀態(tài)下被激活，作為重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可以轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)下游許多基因，涉及腫瘤的血管生成、生長與轉(zhuǎn)移等，使腫瘤細胞適應(yīng)乏氧環(huán)境或者發(fā)生凋亡壞死。本實驗為進一步了解腫瘤細胞在乏氧狀態(tài)下的凋亡和增殖關(guān)系，以及探討HIF-1α在此誘導過程中的作用。 方法：利用二氯化鈷(CoCl<,2>)作為乏氧誘導劑。CBRH7919細胞常規(guī)培養(yǎng)后，COCl<,2>以100μM、20

2、0μM、300μM、400μM濃度分別作用24、48、72和96小時，利用MTT法檢測對肝癌細胞增殖的影響。CBRH7919細胞經(jīng)COCl<,2> 300μM分別處理0、4和24小時后利用RT-PCR法和免疫細胞化學法檢測HIF-1 α在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的表達，利用流式細胞儀檢測肝癌細胞在不同缺氧程度下細胞周期的改變、線粒體膜電位的變化和細胞凋亡率的改變。 結(jié)果： 1、MTT實驗結(jié)果表明CoCl<,2>在200μM，處

3、理24小時即產(chǎn)生明顯抑制作用。隨著藥物濃度的增加和處理時間的延長，抑制作用明顯增強。 2、RT-PCR的結(jié)果顯示對照組細胞HIF-1α mRNA不表達或極低表達，4小時處理組細胞HIF-1α mRNA低表達，而24小時處理組HIF-1α mRNA表達明顯增加。 3、免疫細胞化學法顯示對照組和4小時處理組HIF-1α不表達或極低表達，24小時處理組表達呈陽性或強陽性。4、流式細胞儀結(jié)果顯示COCl<,2>在300μM，0、

4、 4、24小時處理后肝癌細胞凋亡率分別為2.31±1.1％、5.62±2.4％、21.2±7.5％。24小時處理組明顯高于對照組和4小時處理組。對照組和4小時處理組細胞周期改變不顯著，而24小時處理組出現(xiàn)顯著的G<,0>/G<,1>期阻滯。處理組CBRH7919細胞線粒體膜電位較對照組有不同程度的降低。 結(jié)論：利用COCl<,2>可以誘導大鼠肝癌細胞系CBRH7919發(fā)生凋亡。在輕微缺氧時，細胞凋亡不明顯，隨著缺氧程度的