LRRC48蛋白對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞CBRH-7919惡性表型影響的研究.pdf

1、目的:在以大鼠肝切除再生為模型研究細(xì)胞G0/G1期轉(zhuǎn)換的前期工作中，發(fā)現(xiàn)一個(gè)新蛋白LRRC48，該蛋白在大鼠肝切除后短期內(nèi)表達(dá)迅速上調(diào)，持續(xù)兩小時(shí)后開始下降，而在與其相對(duì)應(yīng)的假手術(shù)組中，該蛋白的表達(dá)始終處于低水平。目前對(duì)LRRC48蛋白的功能尚無研究。本課題研究了LRRC48蛋白對(duì)大鼠肝癌細(xì)胞CBRH-7919侵襲、轉(zhuǎn)移能力等惡性表型的影響，以期增進(jìn)對(duì)LRRC48蛋白功能的深入理解，從而可能對(duì)腫瘤防治產(chǎn)生積極影響。
　　 方法:

2、
　　 1.通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LRRC48蛋白高表達(dá)/低表達(dá)對(duì)CBRH-7919細(xì)胞遷移能力的影響;
　　 2.通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LRRC48蛋白高表達(dá)/低表達(dá)對(duì)CBRH-7919細(xì)胞侵襲能力的影響;
　　 3.通過激光共聚焦鬼筆環(huán)肽標(biāo)記法觀察細(xì)胞微絲的分布，檢測(cè)LRRC48蛋白高表達(dá)/低表達(dá)對(duì)CBRH-7919細(xì)胞骨架的影響;
　　 4.建立裸鼠皮下移植瘤模型，檢測(cè)LRRC48蛋白高表

3、達(dá)/低表達(dá)對(duì)裸鼠體重及瘤體生長(zhǎng)的影響;
　　 5.用LRRC48蛋白高表達(dá)及對(duì)照、LRRC48蛋白低表達(dá)及對(duì)照的CBRH-7919細(xì)胞分別建立裸鼠肝癌原位模型;
　　 6.裸鼠肺組織行HE染色，檢測(cè)LRRC48蛋白高表達(dá)/低表達(dá)對(duì)肝癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LRRC48蛋白高表達(dá)組細(xì)胞與其對(duì)照組相比，遷移的細(xì)胞數(shù)目增多;而LRRC48蛋白低表達(dá)組細(xì)胞與其對(duì)照相組比，

4、遷移的細(xì)胞數(shù)目減少;LRRC48蛋白高表達(dá)對(duì)照組、低表達(dá)對(duì)照組細(xì)胞與CBRH-7919細(xì)胞組相比，遷移的細(xì)胞數(shù)目較一致。
　　 2.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LRRC48蛋白高表達(dá)組細(xì)胞與其對(duì)照組相比，侵襲的細(xì)胞數(shù)目增加;而LRRC48蛋白低表達(dá)組細(xì)胞與其對(duì)照組相比，侵襲的細(xì)胞數(shù)目減少;LRRC48蛋白高表達(dá)對(duì)照組、低表達(dá)對(duì)照組細(xì)胞與CBRH-7919組細(xì)胞相比，侵襲的細(xì)胞數(shù)較一致。
　　 3.鬼筆環(huán)肽標(biāo)記法觀察

5、細(xì)胞微絲的分布顯示，處理組細(xì)胞的形態(tài)較未處理組細(xì)胞有所改變，處理組細(xì)胞沒有很好地鋪展開，細(xì)胞邊緣有回縮等貼壁不牢的現(xiàn)象。各組細(xì)胞形成的片狀偽足無明顯差別;
　　 4.皮下注射各組細(xì)胞5天后觀察肝癌裸鼠模型，瘤體形成，造模成功率為100％，注射LRRC48蛋白高表達(dá)組細(xì)胞的裸鼠成瘤體積大于LRRC48蛋白低表達(dá)組;后期，有的裸鼠皮下移植瘤出現(xiàn)萎縮、潰爛的現(xiàn)象，LRRC48蛋白高表達(dá)組發(fā)生率為25％(2/8)，而LRRC48蛋白低表

6、達(dá)組發(fā)生率是87.5％(7/8)，P＜0.01。
　　 5.裸鼠肝原位癌模型中，肺臟出現(xiàn)明顯轉(zhuǎn)移灶，LRRC48蛋白高表達(dá)組形成的轉(zhuǎn)移灶較LRRC48蛋白低表達(dá)組形成的轉(zhuǎn)移灶多。
　　 結(jié)論:
　　 1.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明LRRC48蛋白高表達(dá)使CBRH-7919細(xì)胞遷移能力增強(qiáng);LRRC48蛋白低表達(dá)使CBRH-7919細(xì)胞遷移能力減弱;
　　 2.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明LRRC4