HGF通過促進DNMTs表達影響肝細胞肝癌的惡性表型及預后的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是目前我國發(fā)病率和致死率位居第二位的惡性腫瘤，每年約有30萬例新發(fā)肝癌，約占全球發(fā)病率的50％以上。肝細胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是原發(fā)性肝癌的主要形式，約占肝癌病例的90％。目前對HCC發(fā)生、發(fā)展和轉移復發(fā)的精確分子機制尚缺乏完整認識，深入闡明其發(fā)生、發(fā)展和轉移復發(fā)的精確分子機制是目前肝癌研究的重要方向。
　　 目前普遍認為HCC的發(fā)生是多因素、多途徑、多步驟長期作用的結果。在多

2、種致癌因素作用下，如HBV(HepatitisBvirus)和HCV(HepatitisCvirus)感染、黃曲霉毒素B1(aflatoxinB1，AFB1)攝入、酗酒和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)等，伴隨著肝細胞損傷和肝臟微環(huán)境惡化，從而導致機體遺傳學和表觀遺傳學的累積性改變，最終造成HCC的發(fā)生，因此肝臟微環(huán)境的改變與肝癌的發(fā)生發(fā)展緊密相關。在惡化的肝臟微環(huán)境中，異常

3、表達的肝細胞生長因子（HepatocyteGrowthFactor，HGF）、胰島素樣生長因子（Insulin-likeGrowthFactor，IGFs）、轉化生長因子-β(TransformingGrowthFactor-β，TGF-β)等細胞生長因子，通過結合肝細胞表面相應受體而激活一系列信號轉導通路，在肝癌發(fā)生發(fā)展中起重要促進作用。以染色質共價修飾為主要標志的表觀遺傳網絡作為整合細胞內外環(huán)境因素與基因組遺傳信息的媒介，直接調控基

4、因表達，決定細胞增殖、分化。DNA甲基化和組蛋白修飾是表觀遺傳學重要的修飾形式，其中DNA甲基轉移酶(DNAmethyltransferases，DNMTs)是催化DNA甲基化造成抑癌基因表達沉默的重要調控分子。HCC中常表現出整體基因組廣泛性的DNA低甲基化，而在很多抑癌基因啟動子的CpG島位點卻發(fā)生特異性DNA高甲基化，提示DNA甲基化機制在導致抑癌基因沉默及惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。然而，肝臟微環(huán)境中細胞因子（如HGF）在

5、肝細胞的表觀遺傳中產生了怎樣的影響，以及是如何通過表觀遺傳學機制來調控肝癌惡性表型和預后的尚未清楚。因此，本研究從HGF調控DNMTs或DNA甲基化狀態(tài)的可能機制入手，來研究其對HCC惡性表型及預后的影響。
　　 在本課題中，主要從三個方面進行研究:(1)DNMTs在HCC臨床樣本中的表達及其臨床意義;(2)DNMTs對HCC細胞系惡性表型的影響;(3)HGF如何調控DNMTs表達及其可能機制探討;(4)HGF通過DNA甲基化機

6、制調控的基因表達譜分析和相關靶基因鑒定。結果顯示，DNMT1和DNMT3B在HCC組織中表達明顯上調，與瘤旁組織比較，表達上調比例分別為83.15％(74/89)和85.39％(75/89)，并且表達量與生存期、甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)含量和病理分期等關鍵臨床指標密切相關。同時，分析發(fā)現DNMT1表達上調與AKT通路激活呈正相關。在HCC細胞模型中發(fā)現，HGF能夠明顯上調DNMT1和DNMT3B蛋白水平表達，并能夠

7、調控細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡和遷移等惡性表型。通過甲基化芯片和表達譜芯片分析，篩選并鑒定了多條通過HGF和DNA甲基化調控的候選腫瘤抑制基因(tumorsuppressorgene，TSGs)，如PTEN、PNMT、MYOCD、LHX9、PANX2等，為后續(xù)功能研究奠定了基礎。
　　 本研究進一步明確了DNMTs影響肝癌惡性表型和預后的理論基礎，從細胞生物學和組學角度探討了肝癌微環(huán)境中HGF影響肝癌惡性表型的表觀遺傳學機制，