轉(zhuǎn)錄因子NF-YA通過上調(diào)脂肪酸合酶(FASN)的表達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞惡性表型的體外研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：416523212112南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子NFYA通過上調(diào)脂肪酸合酶（通過上調(diào)脂肪酸合酶（FASN）的表）的表達(dá)促進(jìn)達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞骨肉瘤細(xì)胞惡性表型惡性表型的體外研究的體外研究TranionFactNFYAPromotesOsteosarcomaCellMalignantPhenotypeViaUpregulatingFattyAcidSynthase(FASN)Expressi

2、oninVitro孔令敏孔令敏培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：舒勇教授主任醫(yī)師博士生導(dǎo)師劉志禮副教授副主任醫(yī)師碩士生導(dǎo)師專業(yè)學(xué)位種類：臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)領(lǐng)域名稱：外科學(xué)（骨科）論文答辯日期：2015年5月答辯委員會主席：評閱人：2015年5月摘要II摘要目的：目的：構(gòu)建和篩選上調(diào)和下調(diào)NFYA基因的病毒質(zhì)粒，探討在成骨細(xì)胞以及骨肉瘤細(xì)胞兩種細(xì)胞中，NFYA的表達(dá)差異。研究NFYA基因是否通過改變FASN的表達(dá)，從而

3、影響骨肉瘤細(xì)胞（HOS、U2OS）在體外的增殖、遷移和侵襲的能力。方法方法：（1）常規(guī)培養(yǎng)成骨細(xì)胞（HOB）和骨肉瘤細(xì)胞（HOS和U2OS），分為三組，HOB、HOS和U2OS組。通過qRTPCR和Westernblot實驗，檢測NFYA的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。（2）將PlvCDNFYA慢病毒、PlvSHNFYA慢病毒和PlvNFYA慢病毒質(zhì)粒載體分別轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞（HOS和U2OS），兩種細(xì)胞各分為三組，即PlvCD組、PlvS

4、H組和Plv組。采用MTT法、劃痕愈合實驗以及Transwell侵襲實驗，分別檢測兩種細(xì)胞PlvCD組、PlvSH組和Plv組的增殖、遷徙和侵襲能力；通過qRTPCR和Westernblot實驗檢測PlvCD組、PlvSH組和Plv組的NFYA和FASN的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。結(jié)果結(jié)果：（1）在U2OS，HOS和HOB細(xì)胞中通過qRTPCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測NFYA的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果表明，在成骨細(xì)胞中NFYA的mRNA

5、和蛋白質(zhì)的表達(dá)都明顯低于U2OS和HOS細(xì)胞。因此可以認(rèn)為，NFYA在骨肉瘤細(xì)胞（HOS、U2OS）中表達(dá)高于成骨細(xì)胞（HOB）。（2）HOS和U2OS細(xì)胞子分別轉(zhuǎn)染PlvCDNFYA慢病毒、PlvSHNFYA慢病毒和PlvNFYA慢病毒載體24h。通過qRTPCR和蛋白質(zhì)印跡法實驗，檢測NFYA的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。在骨肉瘤細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染PlvCDNFYA慢病毒載體的NFYA的表達(dá)水平高于轉(zhuǎn)染PlvNFYA的慢病毒載體，而轉(zhuǎn)染P

6、lvSHNFYA慢病毒載體的NFYA的表達(dá)水平明顯低于轉(zhuǎn)染PlvNFYA的慢病毒載體。這些結(jié)果表明，構(gòu)建的含編碼NFYA的慢病毒載體轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞（HOS和U2OS）是成功的。（3）在HOS和U2OS細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染PlvCDNFYA慢病毒、PlvSHNFYA慢病毒和PlvNFYA慢病毒載體，研究NFYA是否促進(jìn)FASN在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)。通過qRTPCR和蛋白質(zhì)印跡法實驗，檢測FASN的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，骨肉瘤細(xì)胞F