轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在骨肉瘤發(fā)生中的作用研究.pdf

1、骨肉瘤是骨組織最常見的惡性腫瘤，同時是兒童與青少年第三常見的惡性腫瘤，血道遠隔轉(zhuǎn)移發(fā)生率高且發(fā)生早，因此其既往治療效果較差。骨肉瘤起源于間葉組織，其發(fā)生與成骨細胞在增殖及分化過程出現(xiàn)異常有關(guān)，導(dǎo)致細胞增殖異常活躍、分化受抑制、凋亡不足。近年來，相繼有研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)錄因子FoxO1與成骨細胞分化密切相關(guān)。
　　FoxO1屬于FoxO基因，而FoxO屬于Forkhead轉(zhuǎn)錄因子家族的亞族，其在進化上高度保守，均含有一個Forkhead

2、保守區(qū)。通過調(diào)節(jié)不同的下游基因表達，F(xiàn)oxO1在細胞增殖、分化、凋亡及抗氧化等多個方面發(fā)揮著重要的作用。FoxO1與多種腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，包括經(jīng)典霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、大腸癌、胰腺癌等。
　　據(jù)此推測FoxO1在骨肉瘤的惡性轉(zhuǎn)化中可能也具有重要作用，因此進行了FoxO1在骨肉瘤發(fā)生過程中作用的研究。
　　目的：探討轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在骨肉瘤發(fā)生，發(fā)展過程中的作用機制。
　　方法：收集臨床骨肉瘤患者及股軟骨瘤患者標本，

3、免疫組化對比兩者之間FoxO1表達差異。病毒感染骨肉瘤細胞系U2-OS、MG-63，通過zeocin篩選，獲得穩(wěn)定表達FoxO1的骨肉瘤細胞株，他莫西芬誘導(dǎo)FoxO1(A3)入核，臺盼藍染色觀察過表達FoxO1對細胞增殖的影響，細胞克隆形成實驗檢測細胞集落形成能力，流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡，Q-PCR及Western blot檢測受FoxO1調(diào)控的下游基因。采用SiRNA在骨肉瘤細胞系HOS中下調(diào)FoxO1，檢測對其細胞克隆形成能力

4、的影響。應(yīng)用FoxO1特異的小分子抑制劑AS1842856處理骨肉瘤細胞株HOS及MNNG/HOS細胞，觀察其對細胞增殖的影響。
　　結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示骨肉瘤標本中FoxO1表達明顯低于骨軟骨瘤及正常骨組織。過表達FoxO1后，細胞增殖受抑，集落形成能力減低，細胞凋亡增加，周期阻滯在G1/S轉(zhuǎn)化期。Q-PCR顯示，凋亡促進基因Bim、Noxa、TRAIL表達均上調(diào)，細胞周期依賴性激酶抑制基因CDKN1B表達亦上調(diào)，細胞周期蛋白