HGF對人臍靜脈和淋巴管的內(nèi)皮細(xì)胞及人結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和移行行為的影響.pdf

1、結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，占消化道惡性腫瘤的第二位。結(jié)直腸癌治療失敗的主要原因是癌細(xì)胞發(fā)生了血行或淋巴轉(zhuǎn)移。研究顯示，結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移不僅與癌細(xì)胞的侵襲能力有關(guān)，還與腫瘤內(nèi)血管、淋巴管的新生密切相關(guān)。大量資料表明，在人類結(jié)直腸癌中存在著血管、淋巴管的新生，而且血管、淋巴管的密度與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)。抑制血管新生可以減少腫瘤的血供，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，減少轉(zhuǎn)移的機(jī)率；抑制淋巴管新生可以降低淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，改善預(yù)后。尋找有效的治療靶

2、點正在成為該領(lǐng)域的一個研究熱點，其中肝細(xì)胞生長因子HGF尤其引人注目。 肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte growth factor，HGF)，又稱離散因子(scatter factor，SF)，是目前發(fā)現(xiàn)的具有最強(qiáng)活性的刺激肝細(xì)胞再生的細(xì)胞因子，曾誤以為它就是特異性肝細(xì)胞生長因子。但實際上，它還對多種細(xì)胞具有促有絲分裂、促移動、促形態(tài)發(fā)生的活性。HGF發(fā)揮其各種生物學(xué)作用，主要通過其受體c-Met實現(xiàn)，c-Met為具有酪氨

3、酸蛋白激酶活性的膜受體，由原癌基因c-met編碼，屬于肝細(xì)胞生長因子受體家族中的一員。已有研究證實HGF在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，而且在血管形成中也發(fā)揮重要作用。最近有研究顯示，HGF還是淋巴管生成的促進(jìn)因子。而血管、淋巴管的新生與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究顯示，血管和淋巴管的形成是由內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、移行和成管等若干步驟組成的。但迄今，HGF在淋巴管形成過程中的作用及機(jī)制尚不清楚，HGF在人結(jié)直腸癌血管、淋巴管新生中的

4、作用機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)的研究。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族中的VEGF-A是腫瘤血管生成的重要因子；而VEGF-C和VEGF-D則是腫瘤淋巴管新生和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控因子。所以，探索腫瘤細(xì)胞如何調(diào)控VEGF家族的產(chǎn)生進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移以及促進(jìn)腫瘤血管、淋巴管生成就成為抗腫瘤脈管生成研究的重點問題。已有研究證實HGF可以上調(diào)結(jié)直腸癌VEGF-A的表達(dá)，但HGF能否調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞VEGF-C和VEGF-D的表達(dá)于國內(nèi)外尚未見報道。

5、 本實驗采用形態(tài)與機(jī)能相結(jié)合的方法系統(tǒng)檢測HGF對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304，人真皮淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)，人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、SW620的增殖、移行行為以及HGF對SW480，SW620的VEGF-A，VEGF-C，VEGF-D表達(dá)的影響，以期為結(jié)直腸癌抗脈管生成尋找治療新靶點。 本實驗分兩部分。 　一HGF對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304、人真皮淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)的增殖、移行的影響本實驗采

6、用MTT法分析HGF對細(xì)胞增殖的作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測HGF對細(xì)胞周期的影響，基底膜重建實驗觀察HGF對細(xì)胞移行的影響，透射電子顯微鏡觀察加入HGF后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果顯示：HGF能促進(jìn)ECV-304、HDLEC增殖。HGF對ECV-304的促增殖作用呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系。而對HDLEC的促增殖作用并不隨著HGF濃度的增加而增強(qiáng)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組相比，ECV-304和HDLEC的HGF組中的GO/G1期細(xì)胞均減少

7、，S期細(xì)胞增多，G2/M期細(xì)胞增多。ECV-304增殖指數(shù)由對照組的37.8％增至47.5％，HDLEC增殖指數(shù)則由對照組的27.3％增至37.1％。HGF也能促進(jìn)ECV-304、HDI正C移行。HGF≥10ngml時能有效促進(jìn)ECV-304移行并且呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系；HGF能有效促進(jìn)HDLEC移行且呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系。透射電子顯微鏡觀察ECV-304和HDLEC細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，加入HGF后，兩種細(xì)胞內(nèi)的微絲均增多。二 HGF對人結(jié)

8、腸癌細(xì)胞SW480和SW620的增殖、移行及VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D表達(dá)水平的影響本研究采用MTT法分析HGF對細(xì)胞增殖的作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測HGF對細(xì)胞周期的影響?；啄ぶ亟▽嶒炗^察HGF對細(xì)胞移行的影響。透射電子顯微鏡觀察加入HGF后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。應(yīng)用Western Blotting檢測兩種細(xì)胞有無c-Met的表達(dá)以及加入HGF前后VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D表達(dá)水平的變化。 結(jié)果顯示，HG

9、F能促進(jìn)SW480和SW620增殖。HGF≥10ngml時開始促進(jìn)SW480和SW620增殖，隨著HGF濃度的增高SW620細(xì)胞增殖緩慢，但對SW480增殖作用不隨著HGF濃度的增加而增強(qiáng)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組相比，SW480的HGF組中的GO/G1期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增多，G2/M期細(xì)胞增多，但HGF對SW620細(xì)胞周期的影響不明顯。SW480增殖指數(shù)由對照組的42.3％增至46.9％，SW620增殖指數(shù)由對照組的32.0％增

10、至33.8％。HGF也能促進(jìn)SW480和SW620移行，基底膜重建實驗顯示，HGF能明顯促進(jìn)SW480、SW620移行且呈質(zhì)量濃度依賴關(guān)系。透射電子顯微鏡觀察SW480和SW620細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，加入HGF后，兩種細(xì)胞內(nèi)的微絲均增多。Western Blotting結(jié)果顯示，HGF的特異性受體c-Met表達(dá)于SW480和SW620細(xì)胞，加入HGF上調(diào)了SW480和SW620細(xì)胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)水平。結(jié)

11、論1 HGF可以促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304和人真皮淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDI,EC)的增殖和移行。HGF對二種細(xì)胞的促移行作用相似，均呈質(zhì)量濃度依賴性，而促增殖作用有所不同。 2.HGF可以促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、SW620的增殖和移行作用。HGF對二種細(xì)胞的促移行作用相似，均呈質(zhì)量濃度依賴性，而促增殖作用有所不同。 3.HGF可以上調(diào)SW480和SW620細(xì)胞的VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D的表達(dá)水平