FGF-2對肺鱗癌細胞SK-MES-1中TRX表達及凋亡的影響.pdf

1、前言:肺癌是常見的惡性腫瘤之一。對于中晚期及術后復發(fā)的肺癌患者，化療是其重要的的治療手段。然而，肺癌對以鉑類為基礎的經(jīng)典化療方案容易產(chǎn)生耐藥，導致化療效果不佳。因此，研究肺癌化療耐藥機制具有重要意義。許多研究表明，成纖維細胞生長因子2(Fibroblast growth factor2，F(xiàn)GF-2)可通過抑制細胞凋亡，參與多種腫瘤耐藥的發(fā)生，但具體機制不清。最新研究發(fā)現(xiàn)，成纖維細胞生長因子受體1(Fibroblast growth fa

2、ctor receptor1，F(xiàn)GFR1)在肺鱗癌中出現(xiàn)特異性基因擴增，F(xiàn)GFR1基因可能是肺鱗癌治療的靶點。FGFR1的生物活性主要是通過與高親和性配體FGF-2結合而發(fā)揮作用。因此，充分認識FGF-2及FGFR1基因在肺鱗癌中的作用及其機制具有重要的意義。此外，研究顯示硫氧還蛋白(thioredoxins，TRX)參與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展。然而TRX是否參與FGF-2介導的對肺鱗癌細胞凋亡的調(diào)控，目前尚無相關報道。
　　 目的:

3、(1)探討FGF-2對肺鱗癌細胞SK-MES-1中TRX表達的影響。(2)探討FGF-2對肺鱗癌細胞SK-MES-1中順鉑誘導凋亡的影響。(3)探討TRX在FGF-2調(diào)控肺鱗癌細胞SK-MES-1凋亡中可能的作用。
　　 方法:(1)應用Western blot檢測FGF-2分別以不同濃度(0、5、10、25、50、75ng/ml)、不同時間(0、4、8、12、24h)作用后，SK-MES-1細胞中TRX的蛋白表達水平，確定FG

4、F-2作用的最佳濃度和時間。(2)應用RT-PCR檢測SK-MES-1細胞中TRX的mRNA表達水平。(3) MTT法測定SK-MES-1細胞中順鉑的半數(shù)抑制濃度IC50(inhibition concentration50％)(4)分析FGF-2對SK-MES-1細胞凋亡的影響，應用Western blot檢測TRX、PARP蛋白表達水平;應用免疫熒光化學檢測TRX在細胞內(nèi)的定位和相對定量;Ac-DEVD-pNA法檢測caspase-

5、3酶活性;流式細胞術檢測細胞凋亡;RT-PCR檢測TRX mRNA的表達水平。(5)應用脂質(zhì)體法將TRX-siRNA轉染入SK-MES-1細胞，熒光顯微鏡觀察轉染效率;Western blot檢測TRX-siRNA抑制效率;Annexin V-FITC/PI染色、流式細胞術檢測細胞凋亡。
　　 結果:
　　 (1) FGF-2以不同濃度作用于SK-MES-1細胞，10ng/ml FGF-2作用組中TRX表達明顯上升，為對

6、照組的(1.89±0.08)倍(P＜0.05)。
　　 (2)10ng/ml FGF-2以不同時間作用于SK-MES-1細胞，8h組中TRX表達明顯上升，為對照組的(2.31±0.04)倍(P＜0.05)。
　　 (3)10ng/ml FGF-2作用8h處理SK-MES-1細胞前后，以及FGF-2+DDP組、DDP組SK-MES-1細胞中TRX的mRNA表達水平無明顯改變(P＞0.05)。FGF-2可能在轉錄后水平上調(diào)S

7、K-MES-1細胞中TRX的表達。
　　 (4)以0、3、10、30、75、150、300mg/L DDP作用于SK-MES-1細胞24h，SK-MES-1細胞存活率隨DDP濃度增加而下降，作圖估算作用于SK-MES-1細胞24h時DDP的IC50，約為30mg/L。
　　 (5) FGF-2可明顯抑制SK-MES-1細胞中caspase-3的活性及caspase-3底物PARP的活化，抑制率分別為(54.13±1.57

8、)％和（34.46±0.53）％(P＜0.05);FGF-2可明顯上調(diào)TRX蛋白的表達(1.87±0.09)倍(P＜0.05)。
　　 (6)肺鱗癌細胞SK-MES-1的細胞質(zhì)和細胞核中均有TRX表達;正常對照、FGF-2+DDP組、DDP組中的TRX表達變化趨勢與上述Western blot結果一致。
　　 (7) FGF-2能明顯抑制順鉑誘導的肺鱗癌細胞SK-MES-1凋亡，抑制率為(41.77±2.42)％(P＜0

9、.05)。
　　 (8) TRX-siRNA可有效抑制SK-MES-1細胞中TRX蛋白表達，TRX-siRNA-1和TRX-siRNA-3的抑制率分別為(50.49±0.06)％和(54.25±0.03)％(P＜0.05)。
　　 (9) FGF-2可明顯抑制饑餓誘導的SK-MES-1細胞凋亡，抑制率為(43.61±1.52)％(P＜0.05);應用TRX-siRNA抑制TRX表達后，SK-MES-1凋亡增加，并可抑制F

10、GF-2的抗凋亡作用，TRX-siRNA組凋亡率為正常對照組的（1.55±0.02）倍(P＜0.05)，TRX-siRNA+饑餓組凋亡率為饑餓組的（1.42±0.03）倍(P＜0.05);TRX-siRNA+FGF2+饑餓組與TRX-siRNA+饑餓組的凋亡率無明顯差別(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 (1) FGF-2可上調(diào)肺鱗癌細胞SK-MES-1的TRX表達。
　　 (2) FGF-2能抑制順鉑誘導的