電針對慢性應激模型大鼠HPA軸-Glu-NMDA受體-NO路徑調節(jié)作用機理的研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的精神疾病，其終生患病率高達15％-20％。抑郁癥居高不下的發(fā)病率以及造成的危害，已經(jīng)越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視。 近年來，治療抑郁癥的新藥層出不窮，但由于抑郁癥的發(fā)病機制很復雜，抗抑郁劑在臨床上出現(xiàn)療效滯后現(xiàn)象，并且大約有30％左右的重度抑郁癥人群對目前的各型抗抑郁劑沒有反應，而且無法擺脫毒、副作用大，患者依從性差等問題。行之有效的治療抑郁癥的方法有著急迫而且巨大的需求。 針刺療法源于中醫(yī)學理論，立足于

2、整體觀念辨證論治，對機體產(chǎn)生廣泛的良性調節(jié)作用。近年來針灸治療抑郁癥越來越多的應用于臨床，產(chǎn)生了較好的臨床療效，且未發(fā)現(xiàn)不良反應。針刺作為替代療法以其特有的優(yōu)勢受到人們的廣泛關注，但針灸抗抑郁療法的研發(fā)才剛剛起步，其產(chǎn)生療效的機制有待深入闡明，研究的深度和廣度都有待進一步提高。 我們的研究以HPA軸-Glu-NMDA受體-NO路徑為研究的切入點，選擇慢性應激刺激誘發(fā)的抑郁模型大鼠作為研究對象。本文選擇臨床上治療抑郁癥行之有效的穴

3、位解釋治療機理，使基礎實驗研究更貼近臨床，以便服務于臨床。通過研究咆針對慢性應激模型細胞因子、激素和相關受體等的影響，探討電針抗抑郁治療的作用機制。通過引入NMDA受體拮抗劑MK-801，從該路徑內多個環(huán)節(jié)相互促進與制約的復雜關系中,探討電針對NMDA受體通道的作用途徑。從而研究電針抗抑邯作用的可能機制。 研究方法及結論： 1．采用7種不可預知的應激原結合孤養(yǎng)方法建立大鼠慢性應激模型。 結論： 此次實驗研

4、究我們選擇的慢性應激結合孤養(yǎng)模型，是在CUMS模型和孤養(yǎng)模型上的發(fā)展，此模型效果穩(wěn)定，可重復性高，接近抑郁癥的發(fā)病特。是研究抑郁較好、較有效的模型，目前被廣泛采用的抑郁癥動物模型。 2．通過開野試驗和游泳試驗，研究慢性應激模型大鼠的行為學變化，從而檢驗造模成功與否及電針對慢性應激模型大鼠行為學的影響。 結論： ①造模后大鼠的水平運動發(fā)生了顯著改變，模型組大鼠的活動度明顯降低，給予電針治療的慢性應激大鼠活動性有所改

5、善，在水平運動次數(shù)上與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.01)；造模后大鼠的垂直運動明顯減少，模型組大鼠的活動度明顯降低，給予電針治療的慢性應激大鼠探究活動有所改善，在垂直運動次數(shù)上與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.05)；況明電針可以改善抑郁模型大鼠活動性及探究興趣，療效與MK-801相當。 ②造模后大鼠強迫游泳不動時間明顯增加，模型組大鼠的活動度明顯降低(P<0.01)，給予電針治療的慢性應激大鼠的強迫游泳不動時間得到

6、改善，與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.05)；MK-801對應激導致的火鼠活動性降低也有明顯改善作用(P<0.05)。提示電針可以改善抑郁模型大鼠活動性，而這種改變的原因可能與動物與惡劣環(huán)境抗爭的意識得到增強有關。 3．運用放免法檢測大鼠下丘腦CRF，垂體ACTH、腎上腺CORT、血清CORT。判斷慢性應激大鼠是否存在HPA軸亢進及電針對HPA軸相關細胞因子及激素的影響。 結論：慢性應激大鼠下丘腦CRF過度分泌(P

7、<0.05)。檢測模型組垂體的ACTH的分泌有增多的趨勢，但相對于空白組并不顯著，僅有增高的趨勢。模型組腎上腺、血清中CORT與空白組相比顯著增加(P<0.05)。說明下丘腦CRF作用于垂體的ACTH含量的增加最終導致了腎上腺和血液中CORT的升高。慢性應激狀態(tài)下大鼠出現(xiàn)HPA軸亢進，電針可以降低CRF、CORT，進而對亢進的HPA軸產(chǎn)生良性調整作用。 4．運用放免法檢測大鼠海馬CORT，運用比色法檢測大鼠海馬內Glu含量，判斷

8、慢性應激大鼠是否影響海馬內興奮性氨基酸含量及電針對海馬內相關激素及神經(jīng)遞質的影響。 結論： 經(jīng)長期慢性應激刺激后，大鼠海馬內CORT顯著升高(P<0.05)，谷氨酸含量明顯升高(P<0.05)。電針可以明顯降低大鼠海馬內CORT、Glu的含量(P<0.05)，有效糾正海馬所處的應激狀態(tài)，降低由HPA軸亢進而導致的對海馬的興奮性毒性作用。 5．運用免疫組化法檢測大鼠海馬內NMDA受體含量，判斷慢性應激大鼠是否存在N

9、MDA受體含量的改變，探討電針對海馬內NMDA受體干預作用可能存在的機制。 結論： 慢性應激條件下，大鼠海馬內NMDA受體含量顯著增加，模型組明顯高于正常組(P<0.05)；電針可明顯降低慢性應激模型大鼠海馬內NMDA受體含量(P<0.05)；經(jīng)MK-801干預后，大鼠海馬內NMDA受體含量亦明顯降低(P<0.05)。電針可通過調節(jié)海馬神經(jīng)元NMDA受體的含量，抑制慢性應激性抑郁癥NMDA受體的過度激活控制NMDA受體通

10、道的開放，減輕細胞毒性作用。 6．運用熒光定量PCR法檢測大鼠海馬內NR2A、NR2BmRNA含量，判斷慢悱應激大鼠是否存在NMDAR受體含量改變，研究在HPA軸亢進狀態(tài)下，上位中楸海馬可能存在的分子病理學改變，分析電針如何通過干預海馬內NMDAR受體而對海馬內神經(jīng)遞質通路產(chǎn)生調整作用。 結論： 模型組與空白組比較，NR2AmRNA含量顯著增加(P<0.01)，電針干預使慢性應激狀態(tài)下大鼠海馬NR2AmRNA的表

11、達有顯著下調(P<0.01)，MK-801(P<0.01)可明顯下調海馬內NR2AmRNA表達。模型組與空白紺比較，NR2BmRNA含量顯著增加(P<0.01)，電針干預使慢性應激狀態(tài)下大鼠海馬NR2BmRNA的表達有顯著下調(P<0.01)，MK-801可明顯下調海馬內NR2BmRNA表達(P<0.01)。電針通過調節(jié)海馬神經(jīng)元NR2A、NR2BmRNA的過量表達，控制NMDA受體通道的開放，從而減輕抑郁癥海馬的細胞毒性作用。

12、 7．運用放免法檢測大鼠海馬內iNoS、NO<,3><'->含量，判斷慢性應激大鼠是否存在一氧化氮含量的改變及電針改善海馬內一氧化氮的毒性作用。 結論： 接受慢性應激刺激后，模型組大鼠海馬組織iNOS和NO含量顯著升高，模型組與正常組比較有極顯著差異(P<0.01)；電針組與模型組比較有顯著差異(P<0.01)，海馬iNOS和NO含量明顯下調(P<0.01)；電針組與MK-801組無顯著差異。電針通過調節(jié)海馬神經(jīng)元NR2