從絡病學說論治糖尿病腎病的理論探討與實驗研究.pdf

1、目的：應用絡病學說探討糖尿病腎病(DN)的中醫(yī)病理機制及治療，制定絡病學說指導下治療DN的中藥芪地通絡膠囊組方，通過觀察芪地通絡膠囊對DN大鼠模型腎臟保護作用、蛋白激酶C(PKC)通路及細胞外基質(ECM)的影響，初步闡明“絡息成積”與ECM成分及調控機制之間的相關性，反證芪地通絡膠囊組方的科學性，進一步佐證絡病學說的科學價值。 方法：理論探討：在廣泛搜集整理歷代醫(yī)家有關論述及當代關于DN文獻的基礎上，依據絡病學說探討DN中醫(yī)病

2、機，指出氣陰兩虛是DN的發(fā)病基礎，絡脈瘀阻、津凝痰聚是DN的主要病理環(huán)節(jié)，絡息成積是DN主要病理改變。確立“益氣養(yǎng)陰、祛瘀化痰、通絡消積”的治法，并據此制定芪地通絡膠囊組方。 實驗研究1芪地通絡膠囊對DN大鼠腎臟保護作用的實驗研究：采用單側腎臟切除并腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法建立DN大鼠模型。將雄性SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、代文組、糖適平組、芪地通絡膠囊低、中、高劑量組。連續(xù)灌胃給藥8周。于實驗前、給藥四周、給藥

3、八周分別記錄、檢測大鼠體重、飲食量、飲水量、24h尿量、空腹血糖、24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白。于末次給藥后留取血液及組織標本檢測糖化血紅蛋白、血尿素氮、血肌酐、肌酐清除率、腎臟系數等指標，應用HE、Masson染色及掃描電鏡技術觀察鏡下病理改變。 2芪地通絡膠囊治療DN的機制研究：雄性SD大鼠，隨機分為假手術組、模型組、代文組、糖適平組、芪地通絡膠囊組。應用流式細胞儀檢測腎組織中葡萄糖轉運蛋白-1(GLUT-1)的表達。應用

4、免疫組化技術檢測腎組織中蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶CβⅡ亞型(PKCβⅡ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、纖維連接蛋白(FN)、層粘連蛋白(LN)、轉化生長因子β1(TGF-β1)、轉化生長因子βⅡ型受體(TβRⅡ)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)的表達，并采用圖像采集分析系統進行定量分析。 結果：1芪地通絡膠囊對DN大鼠腎臟保護作用的實驗研究：給藥八周后，與模型組比較，芪地通絡膠囊高劑量組

5、體重顯著升高(P＜0.01)代文組、芪地通絡膠囊低、中、高劑組飲食量、飲水量顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，各治療組24h尿量均有顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 注射STZ72h后，與假手術組比較，造模組及各治療組血糖均顯著升高(P＜0.01)，組間無差異。給藥四周后，與模型組比較，代文組、芪地通絡膠囊高劑量組空腹血糖水平顯著降低(P＜0.01)。給藥八周后，糖適平組、芪地通絡膠囊中、高劑量組空腹

6、血糖水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 與模型組比較，糖適平組、芪地通絡膠囊中、高劑量組糖化血紅蛋白顯著降低(P＜0.05)。 與模型組比較，代文組、芪地通絡膠囊中、高劑量組血尿素氮水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 與模型組比較，各組血肌酐無顯著差異(P＞0.05)。 與模型組比較，芪地通絡膠囊高劑組肌酐清除率顯著升高(P＜0.01)。 給藥四周后和給藥八周后，與模型組比較，

7、代文組、芪地通絡膠囊中、高劑量組尿微量白蛋白顯著降低(P＜0.05)。 給藥四周和給藥八周后，與模型組比較，各治療組24h尿蛋白定量顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 與模型組比較，芪地通絡膠囊中、高劑量組腎臟系數顯著降低，分別(P＜0.05，P＜0.01)。 HE染色結果顯示：模型組：腎小球體積增大，系膜細胞增多，少數腎小球呈分葉狀，腎小球毛細血管擴張。小管上皮細胞內出現空泡變性，大鼠腎盂的變移上皮下及腎

8、皮質的個別區(qū)域可見炎癥性病變。 代文組、糖適平組、芪地通絡膠囊中、高劑量組：腎小球內毛細血管擴張減輕，與模型組相比，腎小管病變輕微，未見炎癥性損傷。 芪地通絡膠囊低劑量組：腎小球的改變與芪地通絡膠囊大劑量組相似，腎小管空泡化程度較芪地通絡膠囊大、中劑量組嚴重，但未達到模型組的水平。 Masson染色結果：模型組：腎小球系膜基質明顯增多，腎小球基底膜增厚，部分腎小管上皮空泡及顆粒變性。 各治療組：系膜基質較

9、模型組明顯減少，腎小管空泡及顆粒變性較模型組減輕。各治療組之間無明顯差異。 電鏡結果：模型組：基底膜增厚明顯，厚薄不均，足突、次級突起融合明顯，血管內皮細胞增生、裂孔減少明顯。 各治療組：部分基底膜中等增厚，部分增厚不明顯，足突融合較明顯，血管內皮細胞增生較模型組減輕。 2芪地通絡膠囊對DN大鼠腎臟PKC通路的影響：與模型組比較，各治療組GLUT-1顯著降低(P＜0.01)，各治療組間無顯著差異。與模型組比較，代

10、文組與芪地通絡膠囊組PKC的表達顯著降低(P＜0.05)，代文組與芪地通絡膠囊組間無顯著差異；各治療組PKCβⅡ的表達顯著升高與模型組比較均有顯著差異(P＜0.05，P＜0.01)各治療組間無差異。 3芪地通絡膠囊對DN大鼠腎臟ECM成分的影響：與模型組比較，代文組和芪地通絡膠囊組Ⅳ-C、LN表達降低(P＜0.05，P＜0.01)；各治療組FN表達均降低(P＜0.01)，各治療組間無差異。 4芪地通絡膠囊對DN大鼠腎臟E

11、CM調控機制的影響：與模型組比較，各治療組MMP-2均顯著增加(P＜0.01)。與模型組比較，各治療組TIMP-2顯著降低(P＜0.01)，各治療組間無差異。與模型組比較，芪地通絡膠囊組TGF-β1、TβRⅡ表達顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)。 結論：1首先運用絡病學說探討糖尿病腎病的中醫(yī)病機及治療，指出糖尿病腎病是在糖尿病氣陰兩虛日久基礎上，由于絡脈瘀阻、津凝痰聚，終至絡息成積的結果，其絡息成積的病理基礎與DN腎臟EC

12、M成分及調控機制具有內在相關性。確立“益氣養(yǎng)陰、祛瘀化痰、通絡消積”的治法并據此制定芪地通絡膠囊組方，具有理論創(chuàng)新性。 2采用單側腎臟切除并腹腔注射STZ的方法建立DN大鼠模型，觀察芪地通絡膠囊對模型大鼠腎功能、PKC通路及細胞外基質成分及調控機制的影響，結果表明芪地通絡膠囊可以降低模型大鼠空腹血糖、糖化血紅蛋白、24h尿蛋白、尿微量白蛋白、血尿素氮水平、腎臟系數，減慢肌酐清除率的下降，發(fā)揮保護腎臟的作用，芪地通絡膠囊通過降低高