大鼠高血壓相關(guān)性長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩選及其在高血壓發(fā)病中的角色分析.pdf

1、背景：高血壓是已有10億人受影響的全球性的疾病。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(longnon-coding RNA，lncRNA)已被發(fā)現(xiàn)和多種生物途徑和疾病相關(guān)，是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)，但在高血壓領(lǐng)域的報(bào)道是較為缺乏的。
　　目的：探尋在大鼠的高血壓發(fā)病中長(zhǎng)鏈非編碼RNA的可能地位。
　　方法：取5對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和Wistar Kyoto(WKY)大鼠同側(cè)腎臟皮質(zhì)，Trizol法提取總RNA后純化，合成cDNA，熒光標(biāo)記并片

2、段化后區(qū)其中3對(duì)標(biāo)本與Agilent大鼠4*60k lncRNA芯片雜交，掃描后檢測(cè)表達(dá)量;將共表達(dá)的mRNA進(jìn)行基因本體功能分析，預(yù)測(cè)lncRNA可能參與的生物學(xué)途徑;選取其中6對(duì)表達(dá)差異較大的序列，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證其表達(dá)差異;采用核質(zhì)分離方法定位序列在細(xì)胞內(nèi)的位置;選取其中一條差異較大的lncRNA，合成序列的siRNA，在細(xì)胞水平干擾其表達(dá)。
　　結(jié)果：芯片共篩選出145條lncRNA和383條m

3、RNA存在差異表達(dá)，GO(Geneontological)和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路預(yù)測(cè)顯示這些差異表達(dá)的lncRNA和多種分子生物學(xué)途徑相關(guān);實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果指出存在表達(dá)差異(P＜0.05)，并且差異傾向和芯片符合。在細(xì)胞水平利用SiRNA干擾lncRNA使之表達(dá)下調(diào)，但干擾效率一般。
　　結(jié)論：長(zhǎng)鏈非編碼RNA的改變可能在高血壓的病理生理學(xué)途徑中扮演一