丁酸梭菌體外粘附抗菌特性及對鮸魚腸道生理的影響.pdf

1、隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖的規(guī)模化和集約化，水產(chǎn)動物的健康養(yǎng)殖面臨著挑戰(zhàn)。而抗生素和抗菌藥物長期使用，造成諸如細菌抗藥性、耐藥基因的轉(zhuǎn)移、水產(chǎn)品中藥物殘留等不良后果，直接或間接威脅人類健康。益生菌即微生態(tài)制劑，是一類能夠調(diào)節(jié)水產(chǎn)動物腸道微生態(tài)平衡，改善水體環(huán)境，增強機體免疫，促進消化、抵御病原菌侵襲的活的微生物。益生菌的使用是安全有效環(huán)保的，因此研究和開發(fā)水產(chǎn)用益生菌菌株對促進水產(chǎn)養(yǎng)殖有著重要的意義。 丁酸梭菌(Clostridium but

2、yicum)，即丁酸梭菌，常作為益生菌用來防治由于多種因素引起的人和動物的腹瀉、腸炎等疾病。本次實驗研究丁酸梭菌在體外粘附抑制魚常見病原菌的情況，及其對娩魚腸道生理的影響。試驗分三部分：(一)分離和培養(yǎng)鮸魚腸道上皮細胞(intestinal epithelial cell，IEC)，建立腸道上皮細胞的研究模型；(二)丁酸梭菌在IEC模型上的粘附，抑制病原菌粘附作用，及細胞安全性評價；(三)通過飼喂實驗，觀察其對鮸魚腸道組織形態(tài)、消化酶、

3、腸內(nèi)短鏈脂肪酸、腸壁微生物的影響。 主要研究結(jié)果如下： 1 采用Ⅳ型膠原酶、Ⅰ型膠原酶和 EDTA 消化魚腸道中段分離 IEC 細胞，以貼壁時間的不同純化IEC，并縮短處理時間，即可獲得有活力的、較純的 IEC，呈單層生長，可作為試驗的模型。 2丁酸梭菌能夠粘附于腸上皮細胞，粘附率8.03％，且不侵襲細胞，粘附后對細胞損傷相較低。丁酸梭菌能降低鰻弧菌的粘附率，其中競爭試驗，粘附率降低6.71％；排斥試驗，粘附率降

4、低8.27％；替代試驗，粘附率降低4.47％。 3通過飼喂丁酸梭菌，能提高魚的消化酶活性，影響腸內(nèi)短鏈脂肪酸，其中丁酸尤為明顯，中后腸濃度分別增加了2.09mmol/kg、2.12mmol/kg。腸絨毛高度增高，中腸提高了28.81μm，后腸提高了34.23μm。上皮細胞上微絨毛高度增高，中腸和后腸分別增高了1.891μm，1.09μm。電鏡下觀察，可見后腸腸壁上細菌定植。 結(jié)論： 丁酸梭菌具有粘附能力，不存在致