IgA腎病患者體液標本中穿通支原體的分離鑒定.pdf

1、目的： 近年來的研究提示人類致病性支原體的感染與多種自身免疫病相關(guān)，并于2005年Suzuki報道了一例與肺炎支原體感染相關(guān)的急性IgA腎病。本研究為探討IgA腎病患者血液、尿液及咽拭子標本中穿通支原體(Mycoplasmapenetrans，Mpe)的分離檢出率，分析Mpe感染和IgA腎病發(fā)生、發(fā)展相關(guān)性；各體液標本中支原體分離的相關(guān)性；IgA腎病各主要病理分型穿通支原體檢出率的關(guān)系。為IgA腎病發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)因素研究提供

2、一種新的生物學(xué)依據(jù)，為IgA腎病的防治提供一種新的途徑。 方法： 1.分離培養(yǎng) 以2001年-2006年間就診于溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，經(jīng)腎臟活檢確診為原發(fā)性IgA腎病病人，及對照組健康查體人群作為本次研究對象，合計90例。本實驗52例為IgA腎病病人，其中26例患者的腎組織均經(jīng)電鏡觀察并進行病理分型：38例為健康體檢人群。實驗組及對照組的尿液與咽拭子標本經(jīng)0.22μm孔徑濾菌器過濾后的接種于改良的加入去甲

3、腎上腺素的SP-4培養(yǎng)基、解脲脲原體培養(yǎng)基及人型支原體培養(yǎng)基中；兩組EDTA抗凝的血液標本離心后取其血漿白細胞層接種于以上各種支原體培養(yǎng)基。本實驗各血液標本均做無菌培養(yǎng)，每次支原體培養(yǎng)均做陰、陽對照管，以顏色變化來判斷為初代培養(yǎng)陽性。 2.菌株鑒定 接種于加去甲腎上腺素的SP-4培養(yǎng)基中的血液、尿液及咽拭子標本，置于37℃5％CO2培養(yǎng)箱中，逐日觀察；將產(chǎn)酸、變亮黃的可疑陽性培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于支原體固體培養(yǎng)基，37℃5％CO2

4、培養(yǎng)，48小時后置光學(xué)顯微鏡的高倍鏡下觀察，見“油煎蛋”樣菌落，證明支原體生長，同時注意與L型細菌的鑒別；隨后用生化反應(yīng)試驗、套式PCR及核酸序列檢測等方法進一步鑒定。 3.電鏡觀察 用2.5％戊二醛和1％鋨酸雙重固定陽性純培養(yǎng)液和培養(yǎng)陽性的血液標本，后于電子顯微鏡中下觀察的所分離到的支原體形態(tài)。 4.臨床資料分析實驗組與對照組血液、尿液及咽拭子中支原體陽性率進行比較分析：對部分已于電鏡下進行病理分析的IgA腎病

5、者，結(jié)合臨床資料對各病理組各體液標本中支原體檢出率進行統(tǒng)計分析。 5.統(tǒng)計方法 所有計數(shù)資料均采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包X2檢驗進行統(tǒng)計分析與處理，取P＜0.05。 結(jié)果： 1.分離鑒定結(jié)果 1)分離培養(yǎng)在15例(28.8％)患者血液與尿液或/和咽拭子中同時分離到穿通支原體，單獨血液、尿液、咽拭子標本陽性分別為l例(1.9％)、3例(5.8％)與10例(19.2％)。52例IgA腎病患者血液、

6、尿液及咽拭子中穿通支原體的分離檢出率分別為30.8％、21.2％與44.2％；與38例正常對照相血液、尿液及咽拭子檢出率0例、2例(5.3％)與7例(18.4％)相比較，差異均有顯著意義(P＜0.05)，且在正常對照組中無兩種以上標本同時分離出穿通支原體。在52例實驗組中血液合并咽拭子感染者(12例，23.1％)與血液合并尿液感染者(7例，13.5％)無顯著性差異(P＞0.05)，但IgA腎病組咽拭子中Mpe的分離率卻顯著高于尿液中的分

7、離率(P＜0.05)，而對照組中咽拭子與尿液的Mpe分離率卻無差異(P＞0.05)。 2)nPCR結(jié)果培養(yǎng)陽性菌株經(jīng)支原體套式PCR鑒定結(jié)果為穿通支原體。 3)核酸序列分析從IgA腎病患者血液中分離的Mpe具有穿通支原體HF-2株特征性16s-RNA序列片段。 2.電鏡觀察 支原體純培養(yǎng)物經(jīng)負染后可見典型三層膜結(jié)構(gòu)；患者血液標本可檢到支原體，并見有棒槌狀凸起。 3.臨床分析 對26例在電鏡

8、下分型的IgA腎病患者體液標本進行檢測，結(jié)果顯示，從局灶節(jié)段增生性IgA腎病患者血液標本中穿通支原體檢出率為60％，輕微病變性IgA腎病患者中分離率20％；同時咽拭子中Mpe分離率為20％低于其它三組；并且輕微病變性IgA腎病患者尿液中Mpe分離率為0，但經(jīng)統(tǒng)計，四組病理分型各標本穿通支原體的陽性率之間無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.穿通支原體在IgA腎病病人的血液、尿液及咽拭子標本中檢出率均顯著高于正常體健