內(nèi)源性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔血后腦血管痙攣及腦損傷中的作用.pdf

1、研究目的：
　　1.探討內(nèi)源性CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞刪除后對蛛網(wǎng)膜下腔出血后小鼠神經(jīng)功能的影響。
　　2.探討內(nèi)源性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞刪除對蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的影響。
　　3.通過酶聯(lián)免疫吸附法測定皮層IL-6、TNF-α，初步探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞刪除對腦組織炎癥的影響。
　　4.通過免疫熒光法檢測皮層區(qū)炎癥因子IL-6、GFAP的含量，通過westernblot檢測腦組織中IL-6的含量

2、，進(jìn)一步探討內(nèi)源性CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞刪除對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦組織炎癥的影響。
　　研究方法：
　　將雄性昆明小鼠(25-30g)，隨機(jī)分入假手術(shù)組、SAH組、Tregs刪除組以及PBS注射組中。用血管內(nèi)穿刺法建立小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，激光多普勒血流儀記錄頂葉皮層腦組織血流量的變化。假手術(shù)組不穿破血管。Tregs刪除組模型需經(jīng)過小鼠腹腔注射0.20mgCD25+特異性抗體(PC61mAb)，來構(gòu)建Treg細(xì)胞缺失

3、小鼠。PBS腹腔注射組，經(jīng)腹腔注射0.20mg的磷酸鹽緩沖液。術(shù)后處死小鼠后，快速取腦，并用照相機(jī)拍攝腦基底池部出血情況，根據(jù)Sugawara等的報(bào)道，進(jìn)行出血量評分，判定出血等級。采用Garcia評分系統(tǒng)對運(yùn)動感覺進(jìn)行評分，總分為18分。于蛛網(wǎng)膜下腔出血后72h，用干濕重比較法檢測腦組織含水率。用伊文思藍(lán)法評價各組動物血腦屏障通透性。于術(shù)后72h，取腦制成石蠟切片，行蘇木素-伊紅染色，于鏡下觀察各組小鼠基底動脈管徑大小以及管壁厚度的變

4、化。制作腦切片后尼氏染色觀察神經(jīng)細(xì)胞變化。用TUNEL染色觀察腦部細(xì)胞凋亡。用免疫熒光法測定皮層IL6、GFAP的表達(dá)及分布情況。用酶聯(lián)免疫吸附法測定腦組織中IL-6、TNF-α含量。用western blot檢測皮層組織炎癥因子IL6的含量。
　　研究結(jié)果：
　　1.出血程度:假手術(shù)組無出血，假手術(shù)組無出血;蛛網(wǎng)膜下腔出血組、PBS注射組、Tregs刪除組在蛛網(wǎng)膜下腔均見到血液，各組之間出血量無統(tǒng)計(jì)意義的差異。
　　

5、2.神經(jīng)功能評分:假手術(shù)組評分為18分，SAH組、PBS注射組與假手術(shù)組評分相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Tregs刪除組與PBS注射組評分相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與SAH組的評分相比也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.血腦屏障通透性及腦水腫測定:小鼠SAH后血腦屏障通透性增加，腦組織含水量加重;Tregs刪除組與SAH組相比，血腦屏障通透性顯著增加(P＜0.05)，腦組織含水量顯著加重(P＜0.05)。<

6、br>　　4.基底動脈形態(tài):小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈明顯痙攣，Tregs刪除后痙攣更為顯著(P＜0.05)。
　　5.尼氏染色:蛛網(wǎng)膜下腔出血后，小鼠皮層中尼氏小體的神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，Tregs刪除后減少更為顯著(P＜0.05)。
　　6.細(xì)胞凋亡檢測:蛛網(wǎng)膜下腔出血后，小鼠皮層區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)增多，Tregs刪除后與SAH后相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)以及意義(P＜0.05)
　　7.免疫熒光法測定皮層區(qū)IL-6、GFAP

7、SAH組、PBS注射組、Treg細(xì)胞刪除組皮層區(qū)表達(dá)量均增多，Tregs刪除組增多更為顯著(P＜0.05)。
　　8.ELISA測定腦組織中IL-6和TNF-α含量:SAH后小鼠腦組織中IL6和TNF-α表達(dá)量均有所升高，Tregs刪除組與之相比更顯著(P＜0.05)
　　9.Western blot檢測皮層區(qū)IL6:SAH組、PBS組、Tregs刪除組的腦組織中IL6表達(dá)量均增多，Tregs刪除組與SAH組、假手術(shù)組相比有