TSA聯(lián)合Genistein對人喉癌細(xì)胞系HEp2凋亡的誘導(dǎo)和增殖的抑制以及對EMT部分逆轉(zhuǎn)的研究.pdf

1、前言：
　　喉癌是頭頸部常見惡性腫瘤之一，其局部浸潤轉(zhuǎn)移能力及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對患者的預(yù)后產(chǎn)生重要影響。腫瘤的轉(zhuǎn)移是個(gè)多因素參與的多階段的復(fù)雜過程。
　　Epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)是上皮細(xì)胞呈現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)。上皮細(xì)胞形成EMT主要標(biāo)志有如:上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)的降低以及間質(zhì)標(biāo)志物vimentin、snail及N-cadherin表達(dá)的升高。在典型的EMT的

2、模型中，細(xì)胞與細(xì)胞之間失去極性，呈現(xiàn)出典型的形態(tài)學(xué)改變。形成EMT的細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)侵襲能力。越來越多的證據(jù)證明EMT與多種生長因子有關(guān)，如轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β1)，表皮生長因子(EGF)等。但是，EMT形成的機(jī)制到目前為止還不是非常明確;金雀異黃素（又稱染料木素，Genistein）是從大豆中提取的一種黃酮類有效成分，研究表明，Genistein在包括乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、肺癌及前列腺癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展階段存在著多重抑制效應(yīng)

3、;曲古菌素A(Trichostatin A，TSA)是鏈霉素代謝產(chǎn)物，也是第一個(gè)來源于天然產(chǎn)物的組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histonedeacetylase inhibitor，HDACi)，可特異性抑制哺乳動(dòng)物組蛋白去乙?；福菇M蛋白高乙?；?、激活基因表達(dá)、抑制細(xì)胞增殖、引起細(xì)胞分化或凋亡。
　　目的：
　　觀察Genistein聯(lián)合TSA對于人喉癌細(xì)胞株Hep-2 EMT的影響。
　　方法：
　　HEp2細(xì)

4、胞用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)，同時(shí)在培養(yǎng)基中加入EGF(100ng/ml)以及TGF-β1(10ng/ml)，我們同時(shí)轉(zhuǎn)染pGEX-ATF2的人喉癌細(xì)胞系HEp2;倒置顯微鏡下分別觀察24、48 h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的動(dòng)態(tài)變化。應(yīng)用TSA聯(lián)合Genistein誘導(dǎo)HEp2細(xì)胞凋亡，如上細(xì)胞均經(jīng)Western blot、RT-PCR、transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測。
　　結(jié)果：
　　我們證明了TGF-β1聯(lián)合EGF共同誘

5、導(dǎo)可使HEp2細(xì)胞產(chǎn)生EMT，同時(shí)，高表達(dá)ATF2的HEp2亦可以產(chǎn)生EMT。TSA與Genistein均可以對人喉癌細(xì)胞HEp2產(chǎn)生抑制作用，而小劑量的Genistein與TSA(25μM∶50nM)就可以協(xié)同作用于HEp2細(xì)胞，明顯促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，部分抑制由EGF誘導(dǎo)的人喉癌細(xì)胞HEp2產(chǎn)生的EMT。
　　結(jié)論：
　　我們證明了TGF-β1聯(lián)合EGF共同誘導(dǎo)可使HEp2細(xì)胞產(chǎn)生EMT，同時(shí)，高表達(dá)ATF2的HEp2亦可以