微囊藻毒素-LR對(duì)人喉癌細(xì)胞Hep2蛋白磷酸酶2A的抑制作用及產(chǎn)生的細(xì)胞學(xué)影響.pdf

1、研究目的:當(dāng)今水體富營(yíng)養(yǎng)化污染以及由此造成的藍(lán)藻爆發(fā)已成為人類面臨的首要環(huán)境問題。大量藍(lán)藻在水體中生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的許多有毒物質(zhì)微囊藻毒素對(duì)水環(huán)境產(chǎn)生了嚴(yán)重影響并其對(duì)多種生物包括人類都具有威脅。因此，微囊藻毒素的毒性作用機(jī)理已然成為研究熱點(diǎn)。微囊藻毒素LR是其中研究較為廣泛，毒性較大的微囊藻毒素。目前認(rèn)為，微囊藻毒素LR的主要致毒機(jī)理是通過抑制蛋白磷酸酶2A的活性從而產(chǎn)生一系列的細(xì)胞毒性作用。研究發(fā)現(xiàn)蛋白磷酸酶2A的活性對(duì)于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增

2、殖、粘附、遷移等都具有重要的作用。實(shí)驗(yàn)室的前期研究主要著眼于MCLR在多種正常細(xì)胞系中的致毒效應(yīng)并獲得了大量信息，也選擇了一種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步探究MCLR對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，本實(shí)驗(yàn)選取了人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2作為研究對(duì)象。
　　研究方法:應(yīng)用流式細(xì)胞儀、免疫印跡技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)來研究不同濃度的MCLR（0.5μM、1μM、5μM和1

3、0μM）處理Hep-2細(xì)胞24小時(shí)后，產(chǎn)生各種細(xì)胞效應(yīng)以及對(duì)PP2A活性的影響方式和相關(guān)分子變化。
　　研究結(jié)果:在本實(shí)驗(yàn)的濃度和時(shí)間條件作用下，MCLR能夠進(jìn)入到Hep-2細(xì)胞內(nèi)，與PP2A/C亞基共價(jià)結(jié)合抑制PP2A活性;MCLR能夠影響PP2A各亞基蛋白水平，如下調(diào)PP2A/A蛋白表達(dá)，上調(diào)PP2A/C蛋白表達(dá)，略微下調(diào)PP2A/B55α亞基蛋白表達(dá)，但對(duì)PP2A/B56α亞基蛋白表達(dá)影響不明顯;MCLR還會(huì)影響PP2A/C

4、的翻譯后修飾水平，上調(diào)PP2A/C亞基Tyr307位點(diǎn)磷酸化水平和Leu309位點(diǎn)的甲基化水平;MCLR能夠?qū)е翲ep-2細(xì)胞內(nèi)α4和PP2A/C亞基解離并影響AC核心酶穩(wěn)定性;MCLR還能造成細(xì)胞骨架的重構(gòu)以及骨架相關(guān)蛋白Tau、Ezrin和VASP磷酸化水平的上升;MCLR能夠引起P38和ERK1/2通路的激活;MCLR能夠促進(jìn)Hep-2細(xì)胞遷移，但是對(duì)其細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖影響不明顯。
　　研究結(jié)論:MCLR能夠進(jìn)入